ARTICULO 1 Cris

Cuantificación Electroquímica de la capacidad antioxidante de las plantas medicinales Uso Biosensores

Autor: Cristian Hugo Rodriguez Gomez








RESUMEN


La construcción de un biosensor robusta implica obtener parámetros analíticos importantes como duración de la vida, de sensibilidad, de detección y cuantificación límites, cada uno de los cuales se encuentran directamente vinculados a lainmovilización del sistema y, por tanto, a la constante aparente de Michaelis-Menten, desde el más eficaz las enzimas ' inmovilización, a continuación, mayor es la tasa de formación de los productos, El uso de EIS conduce a una descripción de la superficie del sensor y la resistencia de transferencia de carga para cada inmovilización, que señala a la interacción de la enzima con el sustrato.
1.INTRODUCCIÓN
Espectroscopia de impedancia electroquímica es una técnica electroquímica respuesta lineal no invasivo, que implica la perturbación del sistema en estudio por una señal sinusoidal actual o potencial con frecuencia variable, donde la función de transferencia obtenida a partir de la relación de perturbación-respuesta se conoce como impedancia. Hoy en día esta técnica se ha utilizado comouna herramienta en diversos campos de estudio, tales como baterías, cinética de las células de combustible de electrodos, biosensores y procesos biológicos, entre otros.
2. METODOLOGÍA EXPERIMENTAL

2.3.3. Cross-Linking sin albúmina
Un v / v de la mezcla de 5 mg 50% · mL -1 solución de tirosinasa de champiñón con 2,5% GA se preparó y luego 5 l de la mezcla se deposita sobre el electrodo detrabajo y se permite que la polimerización de la membrana a 40 ° C durante 1 h; este sensor se refiere como SPE / Tyr / GA.
2.4. Determinación de K m y K m '
La constante de Michaelis-Menten se obtuvo mediante el ajuste (La aparente de Michaelis-Menten los modelos del Michaelis-Menten por medio de regresión no lineal con la ayuda de OriginLab 9. de Hill y K m ' ) constante se evaluó después de lareducción potenciostático del o-quinona, también llamado benzoquinona, formado enzimáticamente por tirosinasa de champiñón para concentraciones diferentes de catecol
2.5. Preparación de la muestra
Las plantas medicinales se obtuvieron de la zona conocida como las Tierras Cálidas del estado de Guerrero, México (coordenadas: 17 ° 37 'N 99 ° 57'W). Las infusiones se prepararon como sigue: para el mirto( Salvia microphylla ) 4,8637 g de la planta incluyendo el tronco y las hojas se colocan en 50 ml de H 2 O. Por hierba dulce ( Lippia dulcis ) 2,4685 g de la planta incluyendo los tallos, hojas y flores, se colocaron en 50 ml de H 2 O. Para el verdadero bálsamo ( Lippia alba ) se colocaron 7,8930 g de la planta, incluyendo las raíces, tallos, hojas y flores en 50 ml de H 2 O; todas las soluciones seprepararon mediante la infusión durante 5 minutos en H 2 O a 100 ° C, después se decanta la solución y se enfrió a temperatura ambiente.
2.6. Determinación de la capacidad antioxidante en muestras reales
Para determinar la capacidad antioxidante utilizando • Método espectrofotométrico de DPPH y Trolox como estándar, la absorbancia radical DPPH • se midió a 514 nm mediante la variación de laconcentración de Trolox en el sistema. Las curvas de calibración se construyeron de la muestra real para la determinación de la capacidad antioxidante equivalente Trolox (TEAC); los resultados se presentan en g de Trolox por gramo de muestra.

3. RESULTADOS Y DISCUSIÓN



3.1. Evaluación de K m
Con el fin de llevar a cabo la caracterización espectrofotométrica de tirosinasa de champiñón, se obtuvieronlos espectros de la enzima y catecol, para ser utilizado como sustrato similar de la enzima, en un tampón de 0,1 M de acetato a pH 4,50 ± 0,01 y al (30,0 ± 0,5) ° C . La tirosinasa (ver Figura 1 , línea continua) muestra una banda de absorción a 289 nm, y un hombro a 388 nm, ver el recuadro en la Figura 1 , mientras que el catecol (ver Figura 1 , línea de puntos) mostró una banda de absorción a...