Bachiller En Ciencias

¿Qué es la secuenciación del ADN?
La secuenciación de ADN es un conjunto de métodos y técnicas bioquímicas cuya finalidad es la determinación del orden de los nucleótidos en un fragmento ADN.SECUENCIÓN DEL ADN
* Métodos clásicos de secuenciación
* Método automática de secuenciación
* Método de secuenciación de genomas completos

Método enzimático de Sanger
Se basa en eluso de la ADN polimerasa para sintetizar cadenas de ADN con una terminación específica. Con este método se generan fragmentos de ADN de todos los tamaños posibles que se puedan distinguir entre sí. Lasenzimas de ADN polimerasa requieren de cadena sencilla de ADN, y realizan la síntesis de la hebra complementaria en dirección 5’ a 3’. Entre los componentes de la reacción se incluyen nucleótidos queno tienen un grupo hidroxilo en su extremo 3’ (ddNTP), para poder obtener una terminación especifica en las cadenas.
En el método de Sanger, la estrategia es hacer cuatro reacciones diferentes desíntesis de ADN, utilizando un ddNTP distinto en cada tubo. Con la mezcla del nucleótido normal (dNTP) y su 21 terminador (ddNTP), se pueden generar fragmentos complementarios de diferentes tamaños queterminan en el mismo nucleótido. Después, estos fragmentos se pueden separar en un gel de electroforesis con cuatro carriles distintos, para determinar la secuencia del templado

Método automático desecuenciación
* Es una modificación del método desarrollado por Sanger.
Diferencias:
* El tipo de marcaje.
En vez de radiactividad se utiliza fluorescencia y lo habitual es realizar cuatromezclas de reacción, cada una con nucleótido trifosfato (dTTP) marcado con un fluorocromo distinto
* Sistema de detección de los fragmentos de ADN
La detección del tipo de fluorescenciacorrespondiente a cada reacción se lleva a cabo al mismo tiempo que la electroforesis, de manera que los fragmentos de ADN de menor tamaño que ya han sido detectados se dejan escapar del gel

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