berberina
Páginas: 9 (2098 palabras)
Publicado: 3 de junio de 2014
Introducción
Las bacterias han desarrollado defensas contra los agentes microbianos a a través de Bombas de resistencia a multiples farmacos:
Estas bombas presenta niveles elevados de una proteínas transportadora de resistencia llamada MDR o también llamada glicoproteína P.
Esta proteína utiliza la energía derivada de la hidrólisis de ATP para transportar diversos fármacos desde el citosolhacia el medio extracelular, es decir es una bomba dependiente de ATP y está identificada como carrier o transportador de EFLUJOS.
El eflujo activo es un mecanismo responsable para la extrusión de sustancias y antibióticos tóxicos fuera de la célula, es decir, MRD bombea la droga fuera de la célula antes de que esta surta efecto.
Por lo tanto, MRD protegen las células microbianas de losantimicrobiano, siendo cationes anfipáticos los sustratos preferidos.
Se ha identificado que el grupo de Alcaloides berberina, que son agentes antimicrobianos catiónicos producidos por diversas plantas, funcionan como sustrato natural de las bombas siendo fácilmente extruido por MDR, siendo este ineficaz, por lo tanto, debe existir presencia de un inhibidor de MDR.
El inhibidor de MDR es llamado5'-methoxyhydnocarpin (5'-MHC), es un ácido débil anfipático y es claramente diferente de los sustratos catiónicos de una MDR
Un ejemplo de esto es el Eflujo de berberina patógena de Staphylococcus aureus que expresa la bomba de MDR NorA que confiere resistencia a las quinolonas y antisépticos se inhibió completamente por 5'-MHC.
* 5'-MHC no tenía ninguna actividad antimicrobiana sola, peropotenció fuertemente la acción de berberina y otros sustratos NorA contra S.aureus.
Materiales y métodos:
El cultivo de células y pruebas de sensibilidad.
4222 aureus cepa parental S. y Nora mutante KLE 820 y se cultivaron en caldo Mueller-Hinton (MH). Las concentraciones inhibitorias mínimas (MIC) se determinaron por dilución de 2 veces en serie de los compuestos de ensayo
El crecimiento seensayó con un lector de placas de microtitulación (Bio-Rad) por absorción a 600 nm. (incubación 18 hrs a 37° C)
Medición de transporte activo.
Las células se cultivaron a una DO 600 de 1,8, se sedimentaron, y se lavaron con 20 mM de Hepes / NaOH (pH 7,0) tampón. Posterior se resuspendieron en 1 ml de tampón HEPES a un OD 600 de 0,3 que contiene 10 mM CCCP y 10 g / ml de bromuro de etidio.
Lafluorescencia se midió con un espectrofotómetro de luminiscencia a una excitación de 530 nm y longitudes de onda de emisión de 600-nm.
Medición de flujo de salida de la berberina se llevó a cabo siguiendo un procedimiento similar con excitación a 355 nm y emisión a 517 nm.
La concentración de berberina para la carga de las células fue de 30 g / ml.
Aislamiento de los inhibidores de MDR ydeterminación de la estructura.
Tierra, hojas secas (188 g) de B. fremontii se sumergieron en 1200 ml de hexanos que fue tratados con 1000 ml de cloroformo lo cual posteriormente se eliminó a vacío para dejar 1,4 g de residuo oscuro verde-negro que se sometió a cromatografía flash sobre gel de sílice con 9: l de cloroformo / metanol como disolvente de elución.
Resultados y discusión:
Aislamiento delos inhibidores de MDR:
Como se mencinó anteriormente la berberina exhibe propiedades antibióticas relativamente débiles debido a su flujo de salida por MDR. (fig 1: Fórmulas estructurales de los sustratos e inhibidores de Nora.Sustratos que son bases débiles se muestran en su forma catiónica. 5'-MHC es el inhibidor de la MDR)
Una purificación bioensayo impulsada se utilizó para detectarposibles inhibidores de MDR que acompañan a la berberina en Berberis repens, B. aquifolia, y B. fremontii. S. aureus.
Para detectar la actividad inhibidora de la MDR fue probar la acción combinada de un extracto de la planta con berberina añadido a una concentración subinhibitorias.
Por lo que se pensó que los extractos que inhibieron el crecimiento de células en presencia de berberina (sin...
Las bacterias han desarrollado defensas contra los agentes microbianos a a través de Bombas de resistencia a multiples farmacos:
Estas bombas presenta niveles elevados de una proteínas transportadora de resistencia llamada MDR o también llamada glicoproteína P.
Esta proteína utiliza la energía derivada de la hidrólisis de ATP para transportar diversos fármacos desde el citosolhacia el medio extracelular, es decir es una bomba dependiente de ATP y está identificada como carrier o transportador de EFLUJOS.
El eflujo activo es un mecanismo responsable para la extrusión de sustancias y antibióticos tóxicos fuera de la célula, es decir, MRD bombea la droga fuera de la célula antes de que esta surta efecto.
Por lo tanto, MRD protegen las células microbianas de losantimicrobiano, siendo cationes anfipáticos los sustratos preferidos.
Se ha identificado que el grupo de Alcaloides berberina, que son agentes antimicrobianos catiónicos producidos por diversas plantas, funcionan como sustrato natural de las bombas siendo fácilmente extruido por MDR, siendo este ineficaz, por lo tanto, debe existir presencia de un inhibidor de MDR.
El inhibidor de MDR es llamado5'-methoxyhydnocarpin (5'-MHC), es un ácido débil anfipático y es claramente diferente de los sustratos catiónicos de una MDR
Un ejemplo de esto es el Eflujo de berberina patógena de Staphylococcus aureus que expresa la bomba de MDR NorA que confiere resistencia a las quinolonas y antisépticos se inhibió completamente por 5'-MHC.
* 5'-MHC no tenía ninguna actividad antimicrobiana sola, peropotenció fuertemente la acción de berberina y otros sustratos NorA contra S.aureus.
Materiales y métodos:
El cultivo de células y pruebas de sensibilidad.
4222 aureus cepa parental S. y Nora mutante KLE 820 y se cultivaron en caldo Mueller-Hinton (MH). Las concentraciones inhibitorias mínimas (MIC) se determinaron por dilución de 2 veces en serie de los compuestos de ensayo
El crecimiento seensayó con un lector de placas de microtitulación (Bio-Rad) por absorción a 600 nm. (incubación 18 hrs a 37° C)
Medición de transporte activo.
Las células se cultivaron a una DO 600 de 1,8, se sedimentaron, y se lavaron con 20 mM de Hepes / NaOH (pH 7,0) tampón. Posterior se resuspendieron en 1 ml de tampón HEPES a un OD 600 de 0,3 que contiene 10 mM CCCP y 10 g / ml de bromuro de etidio.
Lafluorescencia se midió con un espectrofotómetro de luminiscencia a una excitación de 530 nm y longitudes de onda de emisión de 600-nm.
Medición de flujo de salida de la berberina se llevó a cabo siguiendo un procedimiento similar con excitación a 355 nm y emisión a 517 nm.
La concentración de berberina para la carga de las células fue de 30 g / ml.
Aislamiento de los inhibidores de MDR ydeterminación de la estructura.
Tierra, hojas secas (188 g) de B. fremontii se sumergieron en 1200 ml de hexanos que fue tratados con 1000 ml de cloroformo lo cual posteriormente se eliminó a vacío para dejar 1,4 g de residuo oscuro verde-negro que se sometió a cromatografía flash sobre gel de sílice con 9: l de cloroformo / metanol como disolvente de elución.
Resultados y discusión:
Aislamiento delos inhibidores de MDR:
Como se mencinó anteriormente la berberina exhibe propiedades antibióticas relativamente débiles debido a su flujo de salida por MDR. (fig 1: Fórmulas estructurales de los sustratos e inhibidores de Nora.Sustratos que son bases débiles se muestran en su forma catiónica. 5'-MHC es el inhibidor de la MDR)
Una purificación bioensayo impulsada se utilizó para detectarposibles inhibidores de MDR que acompañan a la berberina en Berberis repens, B. aquifolia, y B. fremontii. S. aureus.
Para detectar la actividad inhibidora de la MDR fue probar la acción combinada de un extracto de la planta con berberina añadido a una concentración subinhibitorias.
Por lo que se pensó que los extractos que inhibieron el crecimiento de células en presencia de berberina (sin...
Leer documento completo
Regístrate para leer el documento completo.