Caracterización Del Hibridoma De Células T 3F8 Específico Para La

UNIVERSIDAD DE SONORA
DIVISIÓN DE CIENCIAS BIOLÓGICAS Y DE LA SALUD
Departamento de Ciencias Químico-Biológicas

Caracterización del Hibridoma de Células T 3F8 Específico para la Proteína PE_PGRS33 (Rv1818c) de Mycobacterium tuberculosis

TESIS PROFESIONAL
Que para obtener el título de:

QUÍMICO BIÓLOGO CLÍNICO

Presenta:
María Carolina Jasso Miranda

Hermosillo, SonoraAgosto del 2010

HIPÓTESIS
El hibridoma de células T 3F8 es específico para la proteína PE_PGRS33 de Mycobacterium tuberculosis y es posible mejorar su grado de activación ante esta proteína mediante la técnica de subclonación celular.

OBJETIVO GENERAL
Subclonar y caracterizar el hibridoma de células T 3F8 específico para la proteína PE_PGRS 33 (Rv1818c) deMycobacterium tuberculosis.

OBJETIVOS PARTICULARES
* Fenotipificar el hibridoma de células T 3F8, evaluando la expresión de las moléculas de superficie CD3, CD4 y CD8 mediante citometría de flujo utilizando anticuerpos monoclonales fluoromarcados.
* Cuantificar y realizar un corrimiento electroforético en gel de acrilamida de la proteína PE_PGRS33.
* Evaluar la especificidad delhibridoma 3F8 hacia la proteína PE_PGRS33 mediante ensayos de procesamiento y presentación de antígeno.
* Subclonar el hibridoma 3F8 y evaluar la especificidad hacia la proteína PE_PGRS33 por parte de las subclonas obtenidas.
* Probar el hibridoma 3F8 y las subclonas del mismo con los péptidos 99 EGVLDVINAPALALLGR115, 130ANGGDGGILIGNGGAGG146, 431GLIGDGGDGGAGGNGTGAKG450 de la proteína PE_PGRS33.INTRODUCCIÓN
La tuberculosis es una enfermedad infecto-contagiosa, prevenible y curable, causada principalmente por Mycobacterium tuberculosis (M. tuberculosis); apareció hace miles de años, y se considera que el surgimiento en humanos pudo haber ocurrido por la transmisión de la infección a partir de animales infectados, lo cual estuvo vinculado con el desarrollo de la agricultura y ladomesticación de animales (García y col., 2009).
Esta enfermedad es una de las principales causas de morbi-mortalidad en el mundo, actualmente provoca cerca de tres millones de fallecimientos a nivel mundial (Chaitra y col., 2007). Aproximadamente una de cada tres personas en el mundo se encuentra infectada con M. tuberculosis, pero sólo del 5 al 10% de esta población tiene un riesgo medio dedesarrollar tuberculosis activa (Van Crevel y col., 2002). La Organización Mundial de la Salud (OMS) estima que ocho millones de personas adquieren tuberculosis cada año, de las cuales el 95% vive en países en desarrollo. La OMS declaró a la tuberculosis como una enfermedad global emergente desde 1993 (Palomino y col., 2007).

A partir del siglo XX se observó una disminución en el grado deincidencia de la tuberculosis, particularmente en los países desarrollados, esto ligado al mejoramiento de las condiciones de vida y por tanto de las condiciones higiénico-sanitarias. Al mismo tiempo, este fenómeno se ve potenciado con la introducción de la vacuna BCG desarrollada por los científicos franceses Calmette y Güerin, así como el uso de nuevos agentes antimicrobianos. Sin embargo, a pesar deestos avances, la tuberculosis aún constituye un serio problema para la humanidad, siendo la causa principal de numerosas defunciones (García y col., 2009).

Varios factores han tenido un alto impacto en el empeoramiento de la situación epidemiológica de la tuberculosis en algunas áreas del mundo, entre las cuales se encuentra la aparición de cepas resistentes a múltiples drogas, lo que constituyeun serio problema de salud pública; la asociación de la tuberculosis con el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH), lo que produce un sinergismo en sus efectos y causa un creciente número de casos y muertes, y al agravamiento de las condiciones socioeconómicas en muchas áreas del mundo (García y col., 2009).
Sumado a estos factores se encuentra la inconsistencia en la eficacia mostrada en...