Citohistoquimicas

INTRODUCCIÓN:
Los organismos eucarióticos unicelulares se multiplican por división
celular, mientras que los organismos pluricelulares crecen por división celular.
Las células eucarísticas de carácter vegetativo tienen dos conjuntos homólogos
de cromosomas “2n” (diploides), debido a que cada progenitor aporta un
conjunto de cromosomas, que representa el número mínimo de cromosomas
“n”(haploide), de la especie correspondiente.
La división celular involucra dos procesos: el primero es la división del
núcleo o mitosis, durante la cual el material genético del núcleo, que ha sido
previamente duplicado durante la interfase, se divide dando origen a dos nuevos
núcleos idénticos; el segundo es la división del citoplasma o citocinesis,
durante la cual se forma una nueva pared celularque separa en entidades
celulares independientes los dos núcleos recién formados, originándose de esta
manera dos nuevas células.
La mitosis es un proceso continuo en el cual se distinguen
convencionalmente cuatro etapas: profase, metafase, anafase y telofase, que se
reconocen por el arreglo de los cromosomas en el citoplasma. El lapso entre una
división y otra se denomina interfase.Existen sustancias químicas capaces de provocar alteraciones en la división
celular, tanto de la mitosis como de la citocinesis.
Una sustancia capaz de alterar la división celular es la colchicina, es
un alcaloide que actúa como inhibidor de la mitosis a nivel de la metafase, ya que
impide la formación del huso acromático y, por lo tanto, evita la separación de
las cromátidas hermanas y sumigración a los polos de la célula. La
colchicina se utiliza para el estudio de la mitosis ya que acumula las células en
metafase. Las células sometidas a la acción de la colchicina que se originan
después de un tratamiento prolongado por más de un ciclo celular pueden ser
tetraploides (4n), pues se duplica el material genético (los cromosomas), pero al
inhibirse la formación de las fibras del husoacromático no migran las cromátidas
hermanas para formar dos núcleos independientes, de forma que se restituye una
membrana nuclear alrededor de un núcleo con contenido multiplicado.
El tejido más comúnmente utilizado para el estudio de la mitosis es el
meristema de las raíces nuevas. En esta práctica se utilizarán raíces de
cebolla. Hay que tener en cuenta que la actividad mitótica varíadurante el día, por lo que lo más correcto es verificar previamente la intensidad de
la actividad mitótica contra las horas del día. Esto permite determinar el momento
en el que el meristema muestra el mayor número de divisiones. Se encontrarán
más figuras mitóticas si la fijación del material no se hace al azar sino a la hora del
día en que el gráfico muestra un pico de mitosis. Sin embargo,como siempre hay
células en división, esto no es absolutamente indispensable.
Nuestro objetivo es:
• 1.- Estudiar la división celular en células somáticas.
• 2.- Aprender los métodos para observar la mitosis al microscopio compuesto.
• 3.- Reconocer las cuatro fases principales de la mitosis.


MATERIALES:
1.- Raíces de cebolla, las cuales se inducen en bulbos colocados en contacto con
aguay en oscuridad durante 4 días a temperatura ambiente. Para facilitar la
aparición de las raíces se raspa ligeramente con una hojilla la zona basal del bulbo
para separar el tejido seco.
2.- Portaobjetos, cubreobjetos, cápsulas de Petri, pinzas, agujas
de disección, hojillas, pipetas Pasteur, papel de filtro y servilletas de papel
absorbente.
3.- Agua destilada, ácido clorhídrico 50% en aguadestilada, carbolfucsina
modificada u orceína acética al 1% (en ácido acético de 45%), glicerina 50% en
agua destilda fenolada.

MÉTODOS:
La preparación de las láminas se realizará de acuerdo al siguiente protocolo:
1.- Lavar las raíces para eliminar el fijador. Para ello coloque las raíces en una cápsula de Petri con agua destilada por 5 minutos. Realice
tres cambios de agua destilada,...