Cu l es la importancia y uso de la tecnica de Gram

1. ¿Cuál es la importancia y uso de la técnica Gram?
El tamaño de la mayoría de las células bacterianas es tal que resultan difíciles de ver con el microscopio óptico. La principal dificultad es la falta de contraste entre la célula y el medio que la rodea. El modo más simple de aumentar el contraste es la utilización de colorantes. Uno muy usado en microbiología es la tinción Gram. Basándose ensu reacción a la tinción Gram, las bacterias pueden dividirse en dos grupos: Gram positivas y Gram negativos. Esta tinción tiene gran importancia en taxonomía bacteriana ya que indica diferencias fundamentales de la pared celular de las distintas bacterias.
2. ¿Enuncie detalladamente el fundamento de la técnica?
Se basan en las diferencias entre las paredes celulares de las bacterias Grampositivas y Gram negativas
La pared celular de las bacterias Gram positivas posee una gruesa capa de peptidoglicano, además de dos clases de ácidos técnicos: anclado en la cara interna de la pared celular y unido a la membrana plasmática, se encuentra el ácido lipoteicoico, y más en la superficie, el ácido teicoico que está anclado solamente en el peptidoglicano (también conocido como mureína).
Por elcontrario, la capa de peptidoglucano de las Gram negativas es delgada, y se encuentra unida a una segunda membrana plasmática exterior (de composición distinta a la interna) por medio de lipoproteínas. Tiene una capa delgada de peptidoglicano unida a una membrana exterior por lipoproteínas. La membrana exterior está hecha de proteína, fosfolípido y lipopolisacárido.
Por lo tanto, ambos tipos debacterias se tiñen diferencialmente debido a estas diferencias constitutivas de su pared. La clave es el peptidoglicano, ya que es el material que confiere su rigidez a la pared celular bacteriana, y las Gram positivas lo poseen en mucha mayor proporción que las Gram negativas.

La diferencia que se observa en la resistencia a la decoloración, se debe a que la membrana externa de las Gram negativas essoluble en solventes orgánicos, como por ejemplo la mezcla de alcohol/acetona. La capa de peptidoglucano que posee es demasiado delgada como para poder retener el complejo de cristal violeta/yodo que se formó previamente, y por lo tanto este complejo se escapa, perdiéndose la coloración azul-violácea. Pero por el contrario, las Gram positivas, al poseer una pared celular más resistente y conmayor proporción de peptidoglucano, no son susceptibles a la acción del solvente orgánico, sino que este actúa deshidratando los poros, cerrándolos, lo que impide que pueda escaparse el complejo cristal violeta/yodo, y manteniendo la coloración azul-violeta.
3. ¿Enuncie cuál es la función de cada uno de los reactivos?

Productos que se utilizan
Reacción y coloración de las bacterias

GRAM +
GRAM -1) Cristal violeta
Células color violeta
Células color violeta
2) Lugol solución iodada
Se forma el complejo CV-I. Las células continúan teñidas de color violeta.
Se forma el complejo CV-I. Las células continúan teñidas de color violeta.
3) Alcohol
Se deshidratan las paredes celulares. Se  contraen los poros. Disminuye la permeabilidad. El complejo CV-I no sale de las células que continúan teñidasde color violeta.
Eliminación por extracción de grasas de las paredes celulares. Aumenta la porosidad. El complejo CV-I se separa de la célula.
4) Safranina
Células no decoloradas; quedan teñidas de color violeta.
Células decoloradas; se tiñen de color rosado.

4. ¿Describa los pasos que la componen y todos los puntos críticos que considere?

Extensión: En un porta objetos bien limpio (conalcohol) se coloca una gota de agua destilada a la que. con el asa de siembra, previamente esterilizada a la llama, se lleva una pequeña cantidad de suspensión de bacterias o, en su caso, de una colonia.
Con el asa se extiende la gota y las bacterias sobre el porta objetos y se fija la extensión por el calor, calentando suavemente a la llama del mechero hasta que se seque.
1 minuto en cristal violeta...