CUANTIFICACION

Cuantificación de bacterias cultivables mediante el método de “Goteo en Placa por Sellado (o estampado) Masivo”

Quantification of cultivable bacteria by the “Massive Stamping Drop Plate” method

Andrés Corral-Lugo1, Yolanda Elizabeth Morales-García1, Laura Abisaí Pazos-Rojas1, Araceli Ramírez-Valverde2, Rebeca Débora Martínez-Contreras1 y Jesús Muñoz-Rojas1*.



1Laboratorio EcologíaMolecular Microbiana, Centro de Investigaciones en Ciencias Microbiológicas, Instituto de Ciencias, Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, México.
2Laboratorio clínico del ISSSTEP, Av. San Baltazar Campeche, Puebla, México.

*Autor correspondencia: PhD. Jesús Muñoz-Rojas, Edificio 103 J, Ciudad Universitaria, San Manuel, México, C. P. 72570. joymerre@yahoo.com.mx





Resumen
Cuandose desea cuantificar el número de bacterias presentes en múltiples muestras, los procedimientos de rutina suelen consumir mucho tiempo. En ese periodo las muestras podrían sufrir modificaciones en su población. En el presente trabajo se evaluó una metodología alternativa para cuantificar bacterias cultivables de forma masiva, rápida y económica en la que se implica el sellado, estampado o impresiónde diluciones seriadas de muestras de diversa procedencia. El tiempo requerido para preparar 22 muestras para su sellado en placa es de 15 minutos. El método se basó en realizar diluciones seriadas (base 10) de las muestras líquidas originales contenidas en una placa multipozos con la ayuda de una pipeta multicanal. Después, con un replicador se tomó un volumen (aproximadamente 1,65 µl) demuestra de cada pozo, que se inoculó por sellado en un medio de crecimiento gelificado de interés. Las placas se incubaron el tiempo necesario, se contó el número de colonias presentes en la dilución contable y se calculó el número de Unidades Formadoras de Colonia por mililitro (UFC/ml) para cada muestra. La metodología se denominó “Goteo por Sellado en Placa Masivo” (GSPM) y ha sido aplicada paracuantificar exitosamente bacterias provenientes de diferentes muestras de laboratorio, por ejemplo, de cultivos líquidos, muestras clínicas (como exudados y secreciones) y bacterias presentes en la rizósfera de plantas de maíz. Sin embargo, la metodología GSPM podría aplicarse para contabilizar masivamente a bacterias de cualquier otra procedencia.

Palabras clave: UFC, goteo en placa, plaqueo,vaciado en placa, GSPM.


Abstract
In an attempt to quantify the number of bacteria present in a high number of samples, routine procedures are usually very time-consuming. During this period of time, bacterial population could be modified. In this work, an alternative for a massive, quick and economic method was evaluated in order to count viable bacteria, consisting in the sealing or stampingof serial dilutions performed in samples from different origins. The time required to prepare 22 samples for plate stamping is only 15 minutes. The quantification was based in performing serial dilutions (10-fold) of the original liquid samples contained in a multiwell plate using a multichannel micropipette. Afterwards, using a replicator, the same volume of each sample (approximately 1,65 µl)was recovered from each well, and then it was inoculated and sealed in a solid growth media of interest. Plates were incubated as needed, colonies were counted in the quantifiable dilution and Colony Forming Units per milliliter (CFU/ml) was calculated for each sample. We called this method “Massive Stamping Drop Plate” (MSDP) and it has been successfully applied to count bacteria from different labsamples, including liquid cultures, clinical samples (exudates and secretions) and bacteria recovered from the rhizosphere of corn plants. However, MSDP could also be applied to massively count bacteria from any other source.
Key words: CFU, drop plate, plating, spread plate, MSDP.
Recibido: febrero 17 de 2011
Aprobado: noviembre 29 de 2012




Introducción
La cuantificación...