DETERMINACIÓN DE UNA CURVA DE CALIBRACIÓN Y ANÁLISIS DE UNA MUESTRA DESCONOCIDA

PRÁCTICA N°2: “DETERMINACIÓN DE UNA CURVA DE CALIBRACIÓN Y ANÁLISIS DE UNA MUESTRA DESCONOCIDA”

REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA
CURVA DE CALIBRACIÓN
Uno de los métodos más utilizados para determinar la concentración de una muestra problema, es el método de la curva de calibración. Esta curva de calibración es una gráfica que relaciona la concentración de al menos cinco soluciones de estándar deconcentraciones conocidas, con la absorbancia de cada uno de ellos a la longitud de onda máxima (λ max).









Una vez obtenida la gráfica se determina la función matemática que presenta dicha recta a través del tratamiento estadístico de regresión de los mínimos cuadrados, la cual relaciona la absorbancia y la concentración de un analito. La siguiente ecuación matemática corresponde a dichafunción:
A = m c + n (Ecuación 1)
A : Absorbancia. n : Intercepto de la recta
m : Pendiente de la recta y que corresponde al producto entre absortividad a de la muestra y el espesor b de la cubeta.
Luego se mide la absorbancia de la solución problema y se interpola su valor en la gráfica o se reemplaza en la ecuación (1), para obtener el valor de concentración del analito. La concentración de la soluciónproblema debe estar comprendida en el rango de concentración que comprende la curva de calibración. Si la concentración de la solución problema es menor que la concentración del estándar más diluido, debe usarse el método de adición estándar, que consiste en adicionar un volumen determinado de un estándar concentrado a la solución problema, antes de realizar la lectura y que permite que estalectura este dentro de las obtenidas para la curva de calibración. En el caso contrario, si la concentración del analito es mayor que la concentración del estándar más concentrado la solución problema deberá ser diluida.










Al hacer la curva de calibración, se debe emplear la longitud de onda de máxima absorbancia (λmax.), para obtener una recta con la máxima pendiente y así tener mayorsensibilidad y precisión al hacer las mediciones.
La medición de la absorbancia de la solución problema debe hacerse a la misma longitud de onda que fue hecha la curva de calibración.


CAFEÍNA
La cafeína es un alcaloide del grupo de las xantinas, concretamente pertenece a la familia de las metilxantinas. Las bases xánticas o púricas son alcaloides derivados de la purina. Concretamente, provienen delanillo de la purina que se forma a través de la condensación de una pirimidina con un imidazol. Poseen una estructura cristalina y su fórmula molecular es C3H4N2.
Las más importantes son las metilxantinas: cafeína, teofilina y teobromina, conocidas respectivamente como 1,3,7-trimetilxantina, 1,3-dimetilxantina y 3,7-dimetilxantina.








La determinación de cafeína ha adquirido mucha importancia,debido a su uso en la industria farmacéutica y en la industria de alimentos; ya sea como ingrediente en la elaboración de refrescos y bebidas energéticas o por su presencia en productos como el té, el mate, el cacao y el café. En todos estos casos, el control de calidad del parámetro cafeína es necesario en los productos que la contienen.
Por esta razón, se han desarrollado nuevos métodosinstrumentales para su determinación en diversas matrices, especialmente en alimentos.

PROCEDIMIENTO
Materiales
01 Espectrofotómetro UV-1700-SHIMADZU.
02 Celdas de cuarzo.
02 Vasos de 250ml.
04 Vasos de 50ml.
01 Fiola de 100ml.
01 Fiola de 50ml.
01 Fiola de 10ml.
01 Pipeta de 1ml.
01 Pipeta de 3ml.
01 Pipeta de 5ml.


a) Preparación de estándares
Primero procedemos a disolver 0.100g de cafeína, llevar ala fiola de 100ml y enrasar con agua destilada. A partir de esta solución madre (patrón A: 10ppm) vamos a hacer las siguientes diluciones que se muestra a continuación:
Tomar 1ml de la del patrón A, llevar a la fiola de 100ml y enrasar con agua destilada.



Tomar 3ml del patrón A, llevar a la fiola de 10ml y enrasar con agua destilada.

Tomar 5ml del patrón A, llevar a la fiola de 50ml y...