Extracción, Visualización Y Cuantificación De Adn

EXTRACCIÓN, VISUALIZACIÓN Y CUANTIFICACIÓN DE ADN

RESUMEN

El ADN constituye el material genético de los organismos, el componente químico primario de los cromosomas y el material del que los genes están formados. La extracción de ADN requiere una serie de etapas básicas, en primer lugar tienen que romperse la pared celular y la membrana plasmática para lograr acceder al núcleo de la célulaluego debe romperse la membrana nuclear para dejar libre el ADN y por último hay que proteger el ADN de aquellas enzimas que puedan degradarlo y para aislarlo hay que hacer que precipite en alcohol, para su cuantificación se utiliza la espectrofotometría que es un técnica en la que se utiliza los efectos de la interacción de las radiaciones electromagnéticas con la materia para medir latrasmisión de luz por las sustancias; y para su visualización se utiliza una técnica denominada electroforesis que consiste en la migración de la moléculas a través de una matriz porosa en el que por acción de un campo eléctrico serán separadas de acuerdo a su peso molecular.

INTRODUCCION

El ADN es una macromolécula que forma parte de todas las células, esta es la que contiene la informacióngenética usada para el funcionamiento y desarrollo de los organismos vivos y de otros sistemas como los virus, El ADN lleva la información necesaria para dirigir la síntesis de proteínas y la replicación. Se llama síntesis de proteínas a la producción de las proteínas que necesita la célula o el virus para realizar sus actividades y desarrollarse. La replicación es el conjunto de reacciones por mediode las cuales el ADN se copia a sí mismo cada vez que una célula o un virus se reproducen y transmite a la descendencia la información que contiene. En casi todos los organismos celulares la información se almacena en el ADN como un código compuesto por cuatro bases químicas: adenina (A), guanina (G), citosina (C) y timina (T). El ADN humano está formado por cerca de 3 mil millones de bases, ymás del 99 por ciento de esas bases son las mismas en todas las personas. La secuencia, de estas bases determina la información disponible para la construcción y el mantenimiento de un organismo. Las bases de ADN se emparejan entre sí, A con T y C con G, para formar unidades llamadas pares de bases. Cada base también se une a una molécula de azúcar y una molécula de fosfato, a este conjunto se ledenomina nucleótido, estos están dispuestos en dos largas cadenas que forman una espiral llama doble hélice. 

Todas las células contienen ADN en sus núcleos celulares a diferencia de las células sin núcleo de los eritrocitos maduros en humanos; también se puede encontrar ADN dentro de otros compartimentos celulares diferentes al núcleo, como las mitocondrias y los cloroplastos. La cantidad deADN presente en algunos tejidos es muy pequeño, por ello no representa una fuente conveniente de extracción, aislamiento y purificación. Para que un tejido sea seleccionado como fuente de ADN deben tenerse en cuenta dos condiciones: contener gran cantidad de material genético y poseer baja actividad de DNAasa que es la que rompe la macromolecular en pequeños fragmentos. Luego de tener elmaterial genético extraído debe ser rápidamente desnaturalizado y tenerse mucho cuidado en su separación, aislamiento y purificación con el fin de conseguir un producto que conserve la identidad e integridad estructural del ADN de la célula que proviene. La tensión mecánica y físico-química, que acompañan los procesos de purificación de las moléculas de ADN deben ser evitadas al máximo para evitarla contaminación de la muestra y las nucleasas inhibidas.

La espectrofotometría es una técnicas utilizada para la detección específica de moléculas. Se caracteriza por su precisión, sensibilidad y su aplicabilidad a moléculas de distinta naturaleza (contaminantes, biomoléculas, etc) y estado de agregación (sólido, líquido, gas). Los fundamentos físico-químicos de la espectrofotometría son...