Exudado Nasal

Cultivo y tinción Gram de exudado nasal.

Objetivo:
Aprender a identificar e investigar microorganismos de importancia clínica, que ocasionan infecciones a nivel del tracto respiratorio, como lo es S.aureus, Streptococcus beta hemolítico grupo A (pyogenes). Así mismo conocer parte de la biota normal de las fosas nasales que puede estar conformada por Streptococcus sp. entre otros.Fundamento:
La mucosa o membrana mucosa es un tipo de tejido que reviste la cavidad nasal. Las cual sirve como barrera para la defensa primaria frente a distintos m.o. que pueden causar infecciones a nivel respiratorio alto. Las membranas mucosas son generalmente tejidos húmedos, bañados por secreciones, tal como ocurre en la nariz. La composición del moco es el 95% es agua, 3% elementos orgánicos y 2%minerales.

Esta práctica se realiza para ver qué tipo de celularidad está presente en el moco nasal nos orientará si el problema es de tipo infeccioso o alérgico. Se realiza mediante un frotis de la mucosa del cornete inferior, empleando un hisopo de algodón. Obteniendo la muestra se trabaja en distintos agares u medios de cultivo como lo pude ser EMB, Sangre, entre otros; para así identificarel tipo de m.o. que puede ser patógeno o de la biota normal.



Materiales, reactivos y equipos:

Hisopo estéril.
Portaobjetos.
Asa bacteriológica calibrada.
Microscopio.
Aceite de inmersión.
Mechero.
Caja Petri con medios de cultivo: Agar sangre, EMB, S110.
Colorante para tinción gram.



Método:

1) Utilizando un hisopo estéril, realizar un exudado nasal y colocar lamuestra en un portaobjetos para fijarlo, teñirlo por gram y observarlo al microscopio.

2) Con otro hisopo estéril, tomar una vez más muestra nasal e inocularlo y estriarlo en los medios de cultivo correspondientes. (Ag, EMB, S110.)


3) Incubar la caja petri con los respectivos medios de cultivo a 37°c por 24hrs.

4) Al término de la incubación, observar macroscópicamente las característicasmorfológicas de las colonias.

5) Realizar pruebas bioquímicas y un antibiograma.

6) Emitir resultados del cultivo nasal.



Pruebas Bioquímicas.

Fundamento:
Las pruebas bioquímicas son reacciones llevadas a cabo in-vitro en medios de cultivos selectivos como: TSI, MIO, citrato de sodio, LIA, SIM y caldo urea. Estas reacciones se realizan en el laboratoriopara identificar las enterobacterias y conocer también su sensibilidad a los antibióticos ya que los microorganismos para su crecimiento y desarrollo requieren de carbohidratos (como glucosa, lactosa, sacarosa), citrato de sodio, proteínas, etc.

Materiales, reactivos y equipos:

Agar TSI (triple azúcar; glucosa, lactosa, sacarosa y hierro).
Agar MIO (movilidad, indol, ornitina).
Agar citratode sodio.
Agar LIA (lisina-arginina).
Agar SIM (H2S, indol, movilidad).
Caldo urea.
Reactivo de Ehrlich o Kovac.
Asa bacteriológica.
Estufa bacteriológica.
Mechero.

Método:
1) En área estéril tomar con el asa bacteriológica parte de la colonia e inocularla por picadura (en medios no inclinados) y también por picadura y estría (en medios inclinados) en los medios de cultivos selectivospara pruebas bioquímicas. Se recomienda una asada para la inoculación de todos los medios, dejando al final al caldo urea.

2) Incubar a 37°c por 24hrs.

3) Interpretar pruebas bioquímicas.


MEDIO DE CULTIVO
COLOR
INTERPRETACIÓN
TSI
ROJO
Amarillo parte superior → fermenta lactosa.


Amarillo parte inferior → fermenta glucosa.


Toda amarilla → fermenta ambos.


Todo rojo →no fermenta.


Si se levanta el medio → Produce gas.
SIM
AMARILLO
Negro → Produce H.S.


Reactivo Indol (Kovac/ Ehrlich) → Rojo indol.


Motilidad → si enturbia (trayectoria de picadura)
CITRATO DE SIMONS
VERDE
Azul → citrato positivo +
MIO (ORNITINA)
MORADO
Amarillo → ornitina positivo +
LIA (LISINA)
LILA
Lila → lisina positiva +


Amarillo → lisina negativa -
CALDO UREA...