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Cromatografía líquida

Tema 12

CROMATOGRAFIA LIQUIDA
En este capítulo se tratarán diversas formas de cromatografía en las que la fase
móvil es un líquido. Potencialmente, la cromatografía líquida (CL) es más importante
que la cromatografía de gases (CG), ya que, cerca del 80 % de los compuestos químicos
no son suficientemente volátiles para separarlos y determinarlos por CG, y enellos se
incluyen una gran variedad de especies de interés industrial, biológico y ambiental.
La cromatografía líquida considerada como clásica se lleva a cabo en columnas
abiertas y en ella la fase móvil fluye por gravedad (figura 12.1.a.) o mediante la
aplicación de vacío, con un dispositivo como el representado en la figura 12.1.b.
eluyente
capa protectora

(arena, papel de filtro)relleno
disco de vidrio sinterizado

.

vacío

a)

b)
Figura 12.1. Cromatografía líquida convencional

Claudio González Pérez

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Tanto en las columnas alimentadas por gravedad, como en las que el proceso se
facilita mediante vacío (también por bombeo del líquido) el mecanismo de la separación
puede ser de adsorción, reparto, intercambio iónico, en función del tamaño
molecular odependiendo de la afinidad entre los diferentes solutos y la fase
estacionaria, originándose distintos tipos de cromatografía que se considerarán en
este capítulo.
La eficacia de las columnas aumenta a medida que disminuye el tamaño de las
partículas del relleno, si bien, en este caso, la fase móvil fluye con mayor dificultad.
Para solucionar las dificultades derivadas del empleo de fasesestacionarias de
tamaños muy pequeños (entre 3 y 10 µm), se requiere una instrumentación sofisticada,
que contrasta con las simples columnas de vidrio usadas en cromatografía clásica.
Estos procedimientos operativos, relativamente modernos, se denominan como
Cromatografía Líquida de Alta Resolución (CLAR o HPLC), cuyas características más
importantes se incluirán también en este capítulo.
En laparte final del capítulo se hará una breve descripción de la cromatografía
de líquidos sobre soporte plano (papel y capa fina), pues con estas técnicas se
consigue la resolución de muchos problemas de forma sencilla y barata. Asimismo, se
hará referencia a la cromatografía de fluidos supercríticos.

CROMATOGRAFIA LIQUIDA CONVENCIONAL
La cromatografía líquida clásica se lleva a cabogeneralmente en columnas de
vidrio como las representadas en la figura 12.1. y cuyas dimensiones dependen de la
cantidad de material a separar. Como regla de uso común, la longitud de la columna
debe ser, por lo menos, equivalente a diez veces su diámetro, de forma que una
columna típica puede ser de 20 cm de largo y entre 1 y 2 cm de diámetro. Para
obtener la máxima eficacia, el relleno de la columnadeberá estar constituido por
partículas de tamaños similares y uniformemente empaquetada, evitando que se
formen canales. De este forma, se minimiza la distorsión de las bandas
cromatográficas. Para conseguirlo, la fase estacionaria suele adicionarse a la columna
en forma de suspensión con una porción de la fase móvil, dejando que se asiente
lentamente, proceso que se facilita en ocasionesmediante una suave agitación.

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Cromatografía líquida

La adición de la muestra por la parte superior de la columna se hará en forma de
disolución concentrada, muy cuidadosamente para no remover la fase estacionaria. Con
esta finalidad, suele colocarse en la parte superior de ésta una fina capa de arena,
lana de vidrio o papel de filtro*.

CROMATOGRAFIA DE ADSORCION (CLS)
Lasespecies químicas (átomos, moléculas, iones) que están en la capa superficial
de un sólido no tienen todas sus cargas eléctricas compensadas y como consecuencia
de ello, presentan fuerzas residuales, o sitios activos, que pueden actuar sobre los
componentes del fluido que baña su superficie, originando fenómenos de adsorción.
Las fuerzas responsables de la adsorción dependen de la naturaleza de la...