genetica

Universidad Nacional Autónoma
De Honduras


Facultad De Ciencias

Escuela De Microbiología

Laboratorio De Genética Para Microbiología
(MB-640)

Practica Nº 2: Electroforesis de Ácidos Nucleicos en Geles de Agarrosa


Integrantes De Grupo:

Ely Faviola Tinoco G.
Rebeca Maria Mendoza A.
Sarah Abigail Pineda E.

Instructora: Sasha Sosa.


Sección: Jueves 4-7 PmCuidad Universitaria,
Tegucigalpa M.D.C Honduras 27 febrero 2014
INTRODUCCIÓN

En este trabajo práctico se utilizó la técnica de electroforesis. Este proceso se basa en la migración de las moléculas con carga neta de una muestra, cuando es sometida a un campo eléctrico, hacia el polo opuesto de su carga. El método no estan sencillo: primero hay que saber con qué tipo de moléculas estamos trabajando y de acuerdo a esto se elige el procedimiento y los materiales necesarios.
Hay dos fuerzas que determinan la velocidad con que una molécula migrará: la fuerza eléctrica y la de rozamiento. La primera es la responsable de que la molécula en cuestión sea atraída hacia uno de los electrodos. Por esto es que cuanto mayorsea el cociente carga/masa de la molécula mayor será la aceleración con que se mueva. La fuerza de rozamiento tiene una acción opuesta: a mayor rozamiento, menor velocidad de migración. Esta fuerza tiene que ver con el tamaño y forma de la molécula que migra, y con las características del medio en que se mueve.
En este trabajo práctico realizaremos electroforesis para separar moléculas de DNAdoble cadena. La carga neta de estas moléculas está dada por los grupos fosfatos: como hay un fosfato cargado negativamente por cada nucleótido y la masa de los cuatro desoxirribonucléotidos es similar, podemos afirmar que el cociente carga/masa será independiente de la secuencia y la longitud de la doble cadena de DNA (todas las moléculas de DNA migrarán entonces hacia el ánodo). Esto quiere decirque no nos tendremos que preocupar por la fuerza eléctrica, ya que las diferencias en la migración estarán dadas exclusivamente por la fuerza de rozamiento. Como las moléculas migran en el mismo medio y todas tienen la misma forma, la velocidad de migración tendrá que ver únicamente con el tamaño de las moléculas (la longitud de la doble cadena, medida en pares de bases). Claro que cuando se correnplásmidos, por ejemplo, no podemos afirmar lo mismo: al tener distintas formas no ocurrirá lo explicado anteriormente. Lo mismo pasaría con RNA o DNA simple cadena que formen apareamientos internos: en esos casos hay que desnaturalizar antes de correr, de modo que resulten cadenas lineales.
Para realizar la electroforesis se utiliza un medio de migración adecuado, de modo que la separación seaeficiente, ya que se necesita que exista una suficiente fuerza de rozamiento para que las moléculas de distinto tamaño se separen. Para ello se utiliza un gel que consiste en una red compuesta por un polímero orgánico (en este caso usamos agarosa, derivado de un polisacárido de un alga) y que aumenta considerablemente la fricción, impidiendo a la vez la difusión de las moléculas a través del medioacuoso en todas las direcciones. Al colocar las muestras de DNA a través de este gel y someterlo a un campo eléctrico durante cierto tiempo, podemos verlas separadas según su tamaño. La rapidez con que migren las moléculas puede ser regulada por la concentración de agarosa disuelta en buffer que usemos: a mayor concentración, mayor compactación de la red y por tanto menor velocidad de migración.La concentración que elijamos dependerá de lo que se quiera separar en cada corrida.
Para la corrida de proteínas, el proceso es diferente. Se suele utilizar una solución de poliacrilamida como gel y además las proteínas deben ser tratadas con SDS (detergente), que permite mantener constante el cociente carga/masa ya que las cargas netas de las proteínas nativas sí dependen de su secuencia. El...