Genética

PCR Y DIGESTION CON ENZIMAS DE RESTRICC




1. DEFINA QUE ES PCR Y COMO ESTA COMPUESTO CADA UNO DE LOS CICLOS DE PCR
PCR  (reacción en cadena de la polimerasa) Es una técnica que se usa para amplificar un fragmento de ADN. Tras la amplificación, resulta más fácil identificar con muy alta probabilidad virus y bacterias causantes de una enfermedad, identificar personas (cadáveres) o haceruna investigación científica sobre el ADN amplificado. El objetivo principal es obtener un gran número de copias de un fragmento de ADN particular, partiendo de una secuencia de nucleótidos de los extremos del fragmento que se quiere amplificar; en teoría basta partir de una única copia de ese fragmento original, o molde.

Paso 1º PCR: Desnaturalización por calor.
El calor (generalmente > 90°C)separa la doble hebra de ADN en dos filamentos, esto se conoce como “desnaturalización".
Puesto que los enlaces del hidrógeno que unen las bases de uno a otro son débiles, se rompen a altas temperaturas, mientras que los enlaces entre fosfatos y desoxirribosa, que son enlaces covalentes más fuertes, permanecen intactos.

Paso 2º PCR: Alineación – unión de la sonda a la secuencia diana.
Elobjetivo no es replicar la hebra entera de ADN sino replicar la secuencia diana de aproximadamente 100-600 pares de bases que es única en el organismo.

Los iniciadores marcan el final de la secuencia diana: éstos son sintéticos y cortos, creados a partir de una hebra única de ADN y que normalmente constan de 20-30 bases, con una marca de biotina 5’ al final para ayudar a la detección.

Temperaturade Alineación: generalmente ocurre entre 40°C y 65°C, dependiendo de la longitud y la secuencia de bases de los iniciadores. Permite que éstos se unan a la secuencia diana con alta especificidad.


Ciclo PCR - Paso 3º: La Taq ADN polimerasa cataliza la extensión de los iniciadores de modo complementario. Se incorporan los nucleótidos
Final del primer ciclo de PCR
Al final del primer ciclo dePCR, nos encontramos dos nuevas tiras de ADN idénticas al original.

Punto final: La ADN polimerasa no reconoce el final de la secuencia. Las nuevas hebras formadas tienen un principio, definido precisamente por el extremo 5’ del iniciador, aunque el extremo 3' no queda definido.

Mientras que el número de ciclos aumenta, una hebra con una longitud más definida sirve como plantilla para lanueva secuencia sintetizada.

La hebra de ADN sintetizada a partir esta plantilla tiene una longitud definida que está limitada por el extremo 5’ de cada uno de los dos iniciadores. Estas hebras de ADN se denominan AMPLICONES.

Después de algunos ciclos, las hebras de DNA que corresponden a la secuencia diana, están presentes en un número mucho mayor que las secuencias de longitud variable.En otras palabras la secuencia flanqueada o definida por los dos iniciadores es la sección que se amplifica.



2. DIGA 3 ENFERMEDADES DE TIPO BACTERIANO CUYO DIAGNOSTICO SE PUEDA REALIZAR POR PCR

Leptospirosis: Es una enfermedad producida por la bacteria Leptospira 
Difteria: Causada por Corynebacterium diphtheriae
Meningocócica: es causada por la bacteria Neisseria meningitidis 


3.ENUNCIE LOS DIFERENTES TIPOS DE PCR Y CUAL ES SU APLICACIÓN EN CADA CASO
PCR Nested o Anidado:
Se utiliza para acotar un resultado y comprende de 2 reacciones de PCR, la primera amplificación da 2 fragmentos resultantes; la segunda reacción trabaja sobre los fragmentos obtenidos en la 1ra.
Este modo es mas especifico, ya que cuando la Taq trabaja con grandes cantidades de DNA, su fidelidaddisminuye, en cambio con este método, se trabaja con fragmentos cortos desde la segunda reacción, lo que hace más efectivo el proceso.
PCR Multiplex:
Se lleva a cabo la reacción de PCR tradicional, pero con más de 2 primers, para amplificar varias regiones al mismo tiempo. Se puede utilizar para identificar especies.
PCR Transcripción Reversa:
En este caso, la única diferencia es que los...