Informe 5 Lab Bio
Páginas: 6 (1251 palabras)
Publicado: 9 de julio de 2015
Universidad Andres Bello
Profesores: Kaiser, Macarena
Fecha: 30/04/2015
Trabajo practico n°5:
Organización celular
Alumnos: Marqués, Jose Ignacio
Torres, María Jose
Paredes, Bastian
Rodriguez, Camila
Introducción
La vida en la tierra se formó hace billones de años como consecuencia de la integraciónespontánea de moléculas. Hoy en día la célula es la unidad básica de la vida, nosotros mismos estamos formados por ellas, pero nuestras células son la evolución de otra más primitiva, llamadas células procariontes, las que conforman actualmente a bacterias.
La célula evolucionada recibe el nombre de célula eucarionte y las podemos diferenciar principalmente por la presencia de un núcleo bien formado ydelimitado por una doble membrana, además podemos encontrar mayor número de organeros, cada uno con funciones importantes dentro de la célula.
A pesar de los avances que han sufrido los microscopios que nos permiten observar la celular detalladamente, se han tenido que inventar nuevos métodos para poder comprender los comportamientos de los compuestos celulares específicamente.
Gracias a lacentrifugación pudimos separar organeros con ayuda de homogenizadores para no desnaturalizar los organelos.
Objetivo
Comprender la técnica de fraccionamiento subcelular por medio de una “ruptura” de la célula y la subdivisión de esta por medio de un campo gravitacional.
Materiales y Métodos
Nuestro objetivo es comprender para lo que sirve el funcionamiento celular, para ello debemos tener una célulaorgánica para así poder romperla mediante esta técnica.
Este método nos permite obtener componentes celulares aislados, en altas cantidades y puros.
Primero se debe homogenizar la muestra, que se puede hacer de distintas maneras, sonificando, shock osmótico o moliendo las células. Después de homogenizar se rompen muchas capas celulares entre ellas la bicapa lipídica y el RE. Los demás organelos dela célula quedan intactos.
La centrifugación funciona de una manera muy simple, usa fuerza de gravedad, por lo tanto al hacer girar muy rápido la muestra se aplicara una fuerza g muy grande. El componente más pesado se ira al fondo debido a la fuerza gravitacional que se le aplica.
Al finalizar el proceso de centrifugación de se debe evaluar mediante el análisis de la presencia de algunoscomponentes, estos componentes son marcadores, como por ejemplo el adn que identificaría los núcleos de la célula.
El experimento
Actividad 1: Fraccionamiento subcelular.
Fraccionamiento del hígado: Se debe homogenizar la muestra de hígado, para ello se muele este y luego se inyecta ULTRA TURRAX la que conserva los organelos, se debe filtrar el homogenizado. A esta solución se le denomina HC(Homogenizado Crudo)
Seguido de esto se lleva a centrifugar la solución a 2500 rpm por 5 minutos, de la que se obtiene el primer pellet (P1) y encima de este hay un sobrenadante (SN1), este sobrenadante se debe centrifugar nuevamente y asi se obtendrá un nuevo pellet (P2) con su respectivo sobrenadante (SN2).
P1 representa la fracción nuclear
P2 representa la fracción mitocondrial
Se puede observarque del sobrenadante de P1 se pueden obtener mitocondrias, con esto podemos deducir que las mitocondrias son organelos relativamente ligeros.
¿Cómo se sabe a que corresponde cada pellet?
Primero debemos tener en cuenta que cada organelo contiene moléculas o enzimas que pueden ser identificadas fácilmente.
El ADN es una macromolécula fácil de identificar, solo agregando azul de tripan, azul detoulidina, y azul B se puede obtener un coloreado de esta macromolécula y así saber donde se encuentra el núcleo de la célula centrifugada.
La mitocondria se deben identificar con una enzima especial llamada succinato deshidrogenada, esta cataliza la deshidrogenacion del succinato formando fumarato durante el ciclo de Krebs:
Succinato -> Fumarato +2H +2e-
Estos protones y electrones liberados...
Profesores: Kaiser, Macarena
Fecha: 30/04/2015
Trabajo practico n°5:
Organización celular
Alumnos: Marqués, Jose Ignacio
Torres, María Jose
Paredes, Bastian
Rodriguez, Camila
Introducción
La vida en la tierra se formó hace billones de años como consecuencia de la integraciónespontánea de moléculas. Hoy en día la célula es la unidad básica de la vida, nosotros mismos estamos formados por ellas, pero nuestras células son la evolución de otra más primitiva, llamadas células procariontes, las que conforman actualmente a bacterias.
La célula evolucionada recibe el nombre de célula eucarionte y las podemos diferenciar principalmente por la presencia de un núcleo bien formado ydelimitado por una doble membrana, además podemos encontrar mayor número de organeros, cada uno con funciones importantes dentro de la célula.
A pesar de los avances que han sufrido los microscopios que nos permiten observar la celular detalladamente, se han tenido que inventar nuevos métodos para poder comprender los comportamientos de los compuestos celulares específicamente.
Gracias a lacentrifugación pudimos separar organeros con ayuda de homogenizadores para no desnaturalizar los organelos.
Objetivo
Comprender la técnica de fraccionamiento subcelular por medio de una “ruptura” de la célula y la subdivisión de esta por medio de un campo gravitacional.
Materiales y Métodos
Nuestro objetivo es comprender para lo que sirve el funcionamiento celular, para ello debemos tener una célulaorgánica para así poder romperla mediante esta técnica.
Este método nos permite obtener componentes celulares aislados, en altas cantidades y puros.
Primero se debe homogenizar la muestra, que se puede hacer de distintas maneras, sonificando, shock osmótico o moliendo las células. Después de homogenizar se rompen muchas capas celulares entre ellas la bicapa lipídica y el RE. Los demás organelos dela célula quedan intactos.
La centrifugación funciona de una manera muy simple, usa fuerza de gravedad, por lo tanto al hacer girar muy rápido la muestra se aplicara una fuerza g muy grande. El componente más pesado se ira al fondo debido a la fuerza gravitacional que se le aplica.
Al finalizar el proceso de centrifugación de se debe evaluar mediante el análisis de la presencia de algunoscomponentes, estos componentes son marcadores, como por ejemplo el adn que identificaría los núcleos de la célula.
El experimento
Actividad 1: Fraccionamiento subcelular.
Fraccionamiento del hígado: Se debe homogenizar la muestra de hígado, para ello se muele este y luego se inyecta ULTRA TURRAX la que conserva los organelos, se debe filtrar el homogenizado. A esta solución se le denomina HC(Homogenizado Crudo)
Seguido de esto se lleva a centrifugar la solución a 2500 rpm por 5 minutos, de la que se obtiene el primer pellet (P1) y encima de este hay un sobrenadante (SN1), este sobrenadante se debe centrifugar nuevamente y asi se obtendrá un nuevo pellet (P2) con su respectivo sobrenadante (SN2).
P1 representa la fracción nuclear
P2 representa la fracción mitocondrial
Se puede observarque del sobrenadante de P1 se pueden obtener mitocondrias, con esto podemos deducir que las mitocondrias son organelos relativamente ligeros.
¿Cómo se sabe a que corresponde cada pellet?
Primero debemos tener en cuenta que cada organelo contiene moléculas o enzimas que pueden ser identificadas fácilmente.
El ADN es una macromolécula fácil de identificar, solo agregando azul de tripan, azul detoulidina, y azul B se puede obtener un coloreado de esta macromolécula y así saber donde se encuentra el núcleo de la célula centrifugada.
La mitocondria se deben identificar con una enzima especial llamada succinato deshidrogenada, esta cataliza la deshidrogenacion del succinato formando fumarato durante el ciclo de Krebs:
Succinato -> Fumarato +2H +2e-
Estos protones y electrones liberados...
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