Introduccion Al Laboratorio De Bacteriologia

UNIVERSIDAD DE CONCEPCION
FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIA



Laboratorio Nº 1


INTRODUCCION AL LABORATORIO DE BACTERIOLOGIA



Introducción y objetivo
La Microbiología se puede definir, sobre la base de su etimología, como la ciencia que trata de los seres vivos muy pequeños, concretamente de aquellos cuyo tamaño se encuentra pordebajo del poder resolutivo del ojo humano. Esto hace que el objeto de esta disciplina venga determinado por la metodología apropiada para poner en evidencia, y poder estudiar, a los microorganismos. (http://www.e-mas.co.cl/categorias/biologia/microbio.htm)
En el presente laboratorio introductorio se dará como inicio una pequeña reseña de las partes constitutivas de un microscopio, con énfasis en losmétodos usados en bacteriología. Se darán a conocer los usos y características de los materiales e instrumentos que serán utilizados a lo largo de nuestro trabajo concluyendo con una explicación sobre la asepsia que requiere el trabajo bacteriológico, para así evitar cualquier tipo de contagio y contaminación de los materiales y el operador.
En términos prácticos realizaremos la observación debacterias en fresco, cuyo objetivo será el de determinar la movilidad celular (movimientos de traslación). Por otro lado con esta observación se pretende poder identificar de manera visible las formas, tamaños y características de cada colonia bacteriana de cada especie.
Por medio de la preparación de un frotis (delgada capa de bacterias distribuidas en la superficie de un portaobjetos y fijado aél) se realizaran diversos tipos de tinciones simples basadas en la acción de un solo colorante sobre la célula. También se realizarán tinciones diferenciales las que permiten juntar las bacterias por su afinidad por los colorantes empleados en ellas agrupándose así en diferentes grupos (gram + y gram -). Por último la tinción especial, cuyas técnicas son más complejas, pero tienen porobjetivo, destacar algunas partes constitutivas de la célula, como por ejemplo los flagelos, capsulas, esporas, etc.

Metodología
1-. Observación a fresco: Esta técnica tiene como objetivo principal observar y determinar la movilidad de las células, y poder presenciar el movimiento browniano el que consiste en el movimiento aleatorio que se observa en algunas partículas nanoscópicas que se hallan enun medio fluido.
2-.Tinciones Simples: Consiste en la aplicación de un colorante sobre la célula bacteriana, por lo que todas estas presentaran solo una coloración. Esta técnica solo se emplea para conocer la forma y la agrupación de las bacterias. Para realizar la tinción de estas se debe preparar un frotis y luego teñir con los siguientes colorantes: azul de metileno por 30 seg. Violeta degenciana por 15 seg. Y safranina por 20 seg. Y luego para eliminar el exceso de colorante solo se debe lavar bajo un fino chorro de agua de la llave.
3-. Tinciones diferenciales: Estas tinciones permiten agrupar los distintos tipos de bacterias que tienen distintas afinidad por los colorantes que se utilizan en ellas. Por lo tanto las bacterias que queden teñidas de distinto color pertenecen adistintos grupos. Estas características o importancias en la tinción también se ve reflejada en otras características de las bacterias como la susceptibilidad o resistencia a determinados agentes antimicrobacterianos. Los cuales se basan en la estructura de la pared celular.
a) Tinción de Gram: Esta tinción emplea dos colorantes, violeta de genciana y safranina. La primera etapa de esta tinciónes la preparación de un frotis con la muestra de bacterias la que se teñirá con la batería de tinción. Primero agregaremos el violeta de genciana durante 60 seg. Luego lavamos rápidamente y aplicamos lugol durante 60 seg. Y lavamos nuevamente. Decoloramos con alcohol etílico al 95% durante 30 seg. Esto permitirá arrastrar el colorante principal de las bacterias que no lo retienen las cuales...