legislacion

MUTAGENESIS
DIRIGIDA

La mutagénesis de sitio
dirigido, también llamada
mutagénesis dirigida, es una
técnica de biología molecular
utilizada para crear
mutaciones puntuales en una
cadenade ADN.

MECANISMO
 El proceso, en primer lugar, requiere sintetizar un
fragmento corto de ADN, el cebador, que contenga
la mutación. El cebador debe hibridar con la
molécula simple(unicatenaria) de ADN que
contiene el gen de interés. Utilizando una ADN
polimerasa, se elonga la cadena (el fragmento
unicatenario más el cebador) incorporando la
mutación al ADN y formando una moléculade
ADN completa bicatenaria. Dicha doble cadena de
ADN puede ser introducida en una célula
hospedadora y clonada. Tras esto, se escogen los
mutantes

Esta técnica no solo hace posible
crearmutaciones puntuales en una
molécula de ADN, sino que también
se pueden producir deleciones e
inserciones.
Se consigue controlar el tipo de
mutación que se pretende realizar en
el ADNmodificando el cebador.

Para las deleciones se utilizan
cebadores que contengan la deleción
pero que tengan la capacidad de
hibridación en la cadena de ADN en
el sitio correcto
 por el contrario,para una inserción el
cebador deberá llevar el fragmento
extra de ADN además de hibridar
correctamente con la cadena molde.

Métodos del Mutagénesis de sitio dirigido

Mutagénesis de sitiodirigido por PCR
Mutagénesis de sitio dirigido por PCR
inversa en un plásmido

Mutagénesis de sitio dirigido por PCR
 Generalmente, se suelen utilizar 4
cebadores: dos de ellos presentan lamutación; y los otros dos únicamente se
utilizan para amplificar la cadena. Puesto
que con la PCR obtendremos una
amplificación exponencial, el fragmento
mutado se amplificará de tal manera quesuperará mayoritariamente al número de
cadenas silvestres sin la mutación. Tras la
PCR, podemos despreciar el número de
cadenas de ADN silvestre en comparación
con las que han sido mutadas.3...