Masa Celular

Laboratorio de Integración Básico: Módulo de Biología Celular
Práctica No. 3
Introducción al cuarto de cultivo celular

Objetivo
El alumno conocerá y se familiarizará con los equipos fundamentales requeridos para el trabajo de rutina en un cuarto de cultivo celular.
Introducción
Los cultivos celulares o de tejido son una herramienta muy importante para la investigación en diversas áreas,las cuales se han visto favorecidas por una serie de innovaciones como el desarrollo de una gran variedad de medios de cultivo, el uso de antibióticos y suplementos como el suero fetal bovino u de otras especies animales, las técnicas de tripsinización para el pasaje de células y el empleo de técnicas de fusión celular para la generación de hibridomas ampliamente utilizadas para la generación deanticuerpos monoclonales. Todo esto ha contribuído a los grandes avances y diversificación en la aplicabilidad de las técnicas de cultivo celular.
Los cultivos pueden ser primarios o secundarios: Son Primarios cuando se obtienen células a partir de un tejido y secundarios cuando uno o varios tipos de células de un cultivo primario se re-siembran (sub-cultivo). Cuando éste cultivo primario essometido a procesos de transformación capaz de conferirle capacidad ilimitada de multiplicación, reciben el nombre de líneas celulares.
Equipo y material necesario en un cuarto de cultivo celular
Dentro de la infraestructura física y básica de un cuarto de cultivo celular se requiere de equipo especial como: campanas de flujo laminar, incubadores de CO2, microscopio óptico, invetido, defluorescencia, entre otros, baño María, centrífuga refrigerada, sistemas de esterilización como autoclaves y equipos de filtración, así como diferentes materiales para el manejo de los cultivos celulares, entre estos se encuentran las pipetas y micropipetas, tubos cónicos, cajas y placas de cultivo, crioviales, contadores de células (Hemocitómetro o cámara de Neubauer), sistemas de almacenamiento ypreservación de células. En el comercio existen diferentes medios de cultivo los cuales podrán ser utilizados de manera diferencial dependiendo del tipo de células con las que se vaya a trabajar. De los más comunmente utilizado se encuentran el DMEM (Dulbecco’s modified Eagle’s Medium), D5F (Dulbecco’s modified Eagle’s Medium suplementado con 5% de suero fetal bovino), HAT (Hipoxantina,Aminopterina y Timidina), R.P.M.I. 1640 (Roswell Park Memorial Institute medium).
En el laboratorio de biología celular es sumamente importante contar con un sistema de preservación celular, los cuales se enlistan a continuación:
1. Equipos: Tanque de nitrógeno y ultracongelador
2. Materiales: crioviales, micropipetas y puntas
3. Reactivos: Medios de cultivo mas algún preservador como DMSO o glicerolLas instalaciones físicas de los cuartos de cultivo deben sujetarse a ciertos lineamientos como por ejemplo evitar corrientes de aire cuando se esté trabajando en la campana, nunca deberán trabajar dos personas a la vez en la campana, se deberá utilizar el equipo de seguridad personal acorde a los riesgos potenciales de los cultivos que se manejen.
Los siguientes son ejemplos de losrequerimientos básicos para el funcionamiento de un cuarto de cultivo
Cabinas de bioseguridad (Labconco)



Las cabinas de bioseguridad son un elemento indispensable en el trabajo de laboratorio clínico especializado y de investigación, especialmente cuando se trabaja con microorganismos y cultivos celulares. Normalmente se les conoce como campanas de flujo laminar, purificadores o gabinetesde bioseguridad. Estos equipos permiten mantener condiciones controladas para el desarrollo de trabajo que implique la necesidad de brindar protección al medio ambiente, al usuario y/o al material con el cual se trabaja. En base a estas características, las cabinas de bioseguridad se clasifican en diferentes categorías: tipo I, II (A, B1,B2, B3) y III.
Clase I. Este tipo de cabinas están...