medico veterinario

II.-Capítulo 3
Herramientas básicas de ingeniería
genética
Gómez, Marisa; Echenique, Viviana
1 Introducción
Hasta aproximadamente 1970 el ADN era
la molécula de la célula que planteaba más
dificultades para su análisis bioquímico. Excesivamente larga y químicamente monótona,
la secuencia de nucleótidos del ADN sólo
podía ser estudiada por caminos indirectos,
tales como la determinaciónde la secuencia
de proteínas, del ARN o por el análisis
genético. Actualmente es posible separar regiones determinadas del ADN, obtener cantidades ilimitadas de esos fragmentos y determinar incluso la secuencia de esos
nucleótidos. Estos adelantos técnicos forman
parte de la tecnología del ADN recombinante, constituida por una mezcla de técnicas, algunas de las cuales son nuevas, pero
otrasson adaptaciones de procesos naturales de la genética microbiana que han sido
estudiados y se conocen en profundidad.
2 Genética microbiana
En los procariotas existen mecanismos de
intercambio genético que permiten tanto la
transferencia de genes como la recombinación. La recombinación genética en procariotas ocurre porque se transfieren fragmentos
de ADN homólogos desde un cromosomadonador a una célula receptora por uno de
estos tres procesos:
• Transformación: es un proceso por
cual el ADN libre del medio ambiente se incorpora en una célula receptora, trayendo
aparejado un cambio genético. Esto ocurre
sólo en algunas especies bacterianas. El movimiento de las moléculas de ADN a través
de la membrana y dentro del citoplasma de
la célula receptora es un proceso activo,que
requiere energía. Una célula que es capaz de
tomar una molécula de ADN y ser transformada se dice que es competente. Estas células secretan el factor de competencia, que es

una pequeña proteína que induce la síntesis
de 8 a 10 nuevas proteínas requeridas para
la transformación.
• Transducción: es un proceso por el cual
el ADN se transfiere de una célula a otra por
medio de un virus(que en el caso de
hospedadores bacterianos se denomina
fago). Puede ocurrir de dos maneras. En la
llamada t ransducción generalizada, u na
fracción del ADN celular, que puede proceder de cualquier porción del genoma del
hospedador, pasa a formar parte del ADN
de la partícula vírica madura, reemplazando
al genoma del fago. En la transducción especializada, que ocurre sólo en algunos fagosatemperados (aquellos que se integran en el
genoma como parte de su ciclo biológico), el
ADN de una región específica del cromosoma
del hospedador se integra directamente en
el genoma del fago, reemplazando algunos
de sus genes. En ambos casos, la partícula
vírica transductora es normalmente defectiva
como virus, ya que los genes víricos han sido
reemplazados. No todos los fagos puedentransducir, ni todas las bacterias son
transducibles. Pero el fenómeno está lo suficientemente extendido para suponer que
desempeña un importante papel en las
transferencias genéticas que se producen en
la naturaleza.
• Conjugación: es un proceso de transferencia genética que requiere contacto de
célula a célula y que está mediado por un
plásmido. Consiste en la transferencia de
una copiade este plásmido al nuevo
hospedador. Sin embargo, otros elementos
genéticos resultan a veces movilizados durante la conjugación, como pueden ser otros
plásmidos o grandes bloques del cromosoma
del hospedador. La conjugación requiere una
célula donadora, que contiene un tipo particular de plásmido conjugativo, y una célula
receptora que carece de él. El contacto se
realiza a través delfilamento o pelo sexual,
que permite el apareamiento específico y que
poseen sólo las células donadoras. Constituye un puente de conjugación a través del
cual pasa el ADN.
3 La clonación molecular
El desarrollo de la tecnología del ADN
recombinante y la clonación molecular han

Biotecnología y Mejoramiento Vegetal

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aportado sofisticados procedimientos que
permiten el a islamiento,...