medio de cultivo para Entamoeba histolytica

PRACTICA No.16
MEDIO DE CULTIVO PARA EL AISLAMIENTO E IDENTIFICACION DE EMTAMOEBA HISTOLYTICA

Practica: 18 personas
OBJETIVO
Saber cómo realizar un cultivo para el aislamiento de E.histolytica
Adquirir conocimiento en el aislamiento de E.histolytica así como conocer su morfología en el medio de cultivo
INTRODUCCIÓN
Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores decrecimiento y otros componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los microorganismos. Los medios de cultivo son de gran ayuda para realizar un diagnóstico completo en los protozoos humanos. Caracterización y homogeneidad de la muestra. Se pueden obtener con facilidad un número elevado de réplicas idénticas. Caracterización y homogeneidad de la muestra.La realización de un medio decultivo permite el control preciso del medio ambiente, se pueden controlar todos los factores del medio, también en un medio de cultivo se puede obtener fácilmente un número elevado de réplicas idénticas.
La E. histolytica es un protozoo perteneciente a la familia Entamoebidae, descubierta en 1875 por Lösch en las heces de un ruso que presentaba disentería grave, este parasito causante de laamebiasis que es una infección que se manifiesta a nivel intestinal y extra intestinal ya que es invasiva y recurrente, E. histolytica ocupa el primer lugar de los protozoos entéricos que atacan al hombre.
MATERIAL
1 matraz Erlenmeyer de 500 ml
18 tubos de ensayo
18 pipeta Pasteur con bulbo
6 aplicadores de madera
4 huevos
5 perlas de vidrio
1 vaso de precipitado 500 ml

MUESTRA BIOLÓGICAMateria fecal

REACTIVOS
Alcohol
Agua destilada ............................ 230 ml
Cloruro de sodio NaCl.................... 2.0700 gr
Cloruro de potasio KCl .....................0.0920 gr
Cloruro de calcio anhidro.................. 0.0460 gr
Cloruro de magnesio MgCl2 ............. 0.0920 gr
Bicarbonato de sodio ........................ 0.0920 gr
Dextrosa .........................0.5520 gr
Suero humano estéril
EQUIPOS
Autoclave
Incubadora

TECNICA
El medio de cultivo LES (suero de huevo de Locke) de Boeck y Drbohlav.

PREPARACION DE SOLUCION DE LOCKE

1.-Se debe disolver en el orden anterior todos los reactivos mencionados en 230ml de agua destilada.
2.-Posteriormente hervir 10 minutos.
3.-Luego enfriar a temperatura ambiente.
4.-Por último, filtrar pararemover el sedimento formado y esterilizar a 15 libras

ESTERILIZACION DE SOLUCION DE LOCKE
1.-Esterilice en autoclave durante 15 min a 121°C y 15lb/in2 de presión
2.- Enfríe a temperatura ambiente
3.-Si hubiera precipitado, separe por filtración, en papel Whatman no. 1
4.- Vuelva a esterilizar a 121°C durante 15 minutos
5.- Guardar en frasco tapado y rotulado para su almacenado

PROCEDIMIENTOPARA EL MEDIO DE CULTIVO LES
1.- Se lavan los 4 huevos posteriormente se limpian con alcohol, se rompen y se vacían en un matraz con perlas de vidrio
2. Se le agregan 50 ml de la solución de Locke y se agita muy rápidamente.
3. Se incorpora suficiente mezcla de huevo con Locke en los tubos de ensaye, de tal manera que se inclinen los tubos a 30°
4. Se colocan los tubos en un coagulador y secalienta a 70° C hasta que se solidifique.
5.-Después de enfriado al medio ambiente, se le debe de agregar una mezcla de 8 partes de solución de Locke estéril más una parte de suero humano estéril inactivado.
6.-Esto se debe de incubar a 37ºC durante 24 horas para determinar esterilidad.
7.- Transcurridas las 24 horas, sacar de la estufa los tubos de cultivo sembrados.
8.- Con la pipeta Pasteur,retirar el sobrenadante, dejando un sedimento de 1.0 ml.
9.- Agitar un poco el sedimento.
10.- Con la pipeta Pasteur, tomar una gota de sedimento, colocarla sobre el portaobjetos y cubrir con un cubreobjetos
11.- Finalmente observar al microscopio.

PROCESO DEL SEMBRADO
Este proceso del inoculo se hace preferentemente de la muestra donde haya moco, sangre o ambos.
1. Si las heces son...