micobiologia

PROCEDIMIENTOS

1. Mesófilos:
_Se midieron 11 ml de jugo de lechosa y se le adicionaron 99ml de agua peptonada, para homogenizar y realizar las diluciones seriadas hasta 10 -6.
_Se colocó 1 mlde cada una de las diluciones decimales seriadas preparadas en las cajas de Petri estériles.
_Se agregó a cada caja de Petri agar nutritivo, previamente fundido.
_Se dejó solidificar el agar y seinvirtieron las cajas, posteriormente fueron llevados a incubar 24 horas a 35 ºC
_Luego se contaron las colonias.

Procedimientos:

a) Prueba presuntiva:
Se agregaron 11 ml de Nestea, con 99 mlde diluyente, se mezclaron hasta homogenizar, realizando las diluciones a partir de ella.
Se realizaron diluciones decimales seriadas hasta 10-6.
Se colocaron y agitaron 1 ml de cada dilución en trestubos de caldo lactosado o caldo lauril sulfato.
Se llevaron a incubar a 37°C durante 24 horas.
Se leyeron como positivos todos aquellos tubos que presentaron producción de ácido y gas.
b) Pruebaconfirmatoria
Se realizaron azadas de los tubos de ensayo que resultaron positivo en la prueba presuntiva en Caldo Bilis Verde Brillante (BVB).
Se llevó a incubar a 37° C durante 24 h.
Se leyeroncomo positivos los tubos que presentaron crecimiento y producción de gas, reportando como N.M.P de coliformes totales/ml.
c) Prueba confirmatoria para coliformes termotolerantes:
Se realizaronazadas de los tubos positivos en caldo BVB a tubos con caldo EC previamente rotulados.
Se llevó a incubación a 44° C por 24 h, leyendo como positivos los tubos de caldo EC que presentaron crecimiento ygas, reportando como N.M.P de coliformes fecales/ml.
d) Determinación de Escherichia coli:
Se sembraron por estría en agar EMB aquellos tubos que presentaron resultados positivos en las pruebas decaldo BVB y caldo EC.
Se llevaron a incubar a 37° C durante 24 h.
Se leyeron como positivos aquellas diluciones donde se observó crecimiento característicos de Escherichia coli (colonias pequeñas d...