Parcial Instrumental

4 Junio de 2015 
Universidad Nacional de Colombia 
Facultad de Ciencias ­ Departamento de Química  
 

 

Daniel Eduardo Bohórquez 

174872 

Carlos Andres Ipiales Leiton             174515 
 
Análisis de aminoácidos libres presentes en ​
Solanum Tuberosum ​
grupo ​
Phureja ​
vía HPLC y 
cromatografía de intercambio iónico. 
INTRODUCCIÓN 
El cultivo de la papa ocupa el cuarto lugar en el mundo en importancia después del arroz trigo y maíz. 
La  papa  criolla  posee  características  valiosas  dados  sus  altos  valores  nutricionales,  vitaminas, 
minerales,  fibra  y  gran  cantidad  de  proteínas.   Las  características  principales  de  este  tubérculo 
originario de Colombia son:[1][2] 
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Diámetro: 25mm 35mm 
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Peso: 20­25g 
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         ​Color natural: cáscara amarilla 
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Color natural de la pulpa: amarilla 
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Género: Solanum 
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Especie: S. Phureja 
Se  cultiva   en  las  diferentes  regiones  del  país  en  diferentes  condiciones  de  suelo.  Es  la  principal 
variedad  de  papa criolla  cultivada en Colombia y hasta  la presente es la variedad que se procesa para 
exportación como precocida congelada.[2] 
 MUESTREO 
La  apariencia  del  producto  debe  ser  muy  bueno,  reflejada  en  tubérculos  redondos  de  ojos 
superficiales,  piel  lisa  y  color  característica  de  yema  de  huevo,  el  color  de  la  pulpa  debe  ser 
homogéneo.[1] 
Pelar  500g  de  las   papas  en  un  pelador  mecánico  y triturar  en  una  licuadora durante 30 segundos  en 
850mL  de  etanol  al  70%;  se  asume  que  en  la papa  existe  20%  de  material  seco.  Una  porción  de 
sobrenadante  (250mL   representan  100g  del  peso  del  tubérculo  fresco,  en  este  momento  se  hace  el 
cuaterning  para  que  la  muestra  sea  representativa  del  lote).   Esto  se  mezcla  con  50g  de  Celite  545 
(Ayuda a  hinchar  las moléculas  para  su  posterior  filtración), esta  mezcla se  pone en  una columna  de 50cm  X  3cm  de  vidrio,  con  vidrio  sinterizado  al  final  (Previamente  se  trata  la  columna  con  una  
solución de Celite 545 en etanol acuoso y se deja ocupando 1 cm desde el fondo).[3] 
 
EXTRACCIÓN 
Etanol  acuoso del 70% V/V es  percolado toda  la noche y los  eluidos  se recogen en un matraz de 2L, 
después de recogidos 1900mL del eluido y se lleva a volumen con la mezcla. 
Una muestra de extracto de 500mL se  almacena  a ­20°C  por si  se requiere para un posterior análisis, 
la solución  es  calentada en una cabina o  cuarto de los cuales  100mL de este extracto son reducidos a  
un volumen de 10mL usando un rotavapor a una temperatura que no exceda los 40°C, el contenido del 
matraz de evaporación  fue transferido  cuantitativamente a  un matraz de 100mL y se llevó a volumen  
con agua, se adicionan (10ml)  de HCL 0.1 M y se lleva a volumen con agua desionizada; una muestra  
de  esta  solución  de  1mL  es  aplicada  a  la  columna  cromatográfica  con  10mL  que  contenga  0.1 
micromol  de  Norleucina  como  estándar  interno,  este  método  se  conoce  como   el  método  de 
Laird.[3][4] 
almacenamiento: 
para  el  almacenamiento  del  extracto  se  realiza una  liofilización  y  este  es  almacenado  en  un cuarto 
oscuro a una temperatura de ­20ºC.[5][13] 
 
MÉTODO  
Es sabido que los  aminoácidos  son especies  químicas  de  polaridad  marcada, por lo cual se usaría una  
fase normal  para  su  separación, pero esta  no  ofrece buenos resultados por lo tanto lo recomendado es  
derivatizar los analitos  para mejorar  las  resolución de los picos cromatográficos y su estabilidad en la 
columna  de  separación.  Esta  se  realizará  usando  HPLC.  La  derivatización  se  lleva  con 
o­ftaldialdehido  2­mercaptoetanol  en  medio  alcalino  que  derivan  en  compuestos  isoindólicos 
fluoróforos,  se  permite  a  la  muestra  reaccionar  durante  90  segundos  en  el  bucle  automuestreador 
(autosampler   fill  loop).  La  fase ...