plantologia

Extracción y separación de pigmentos fotosintéticos en plantas
Una de las fuentes de energía más importantes para los seres vivos es la luz solar. Esta energía luminosa es utilizada por las plantas para realizar fotosíntesis y por medio de este proceso, producir compuestos orgánicos (carbohidratos) a partir de CO2 y agua. [1] Todo este proceso ocurre primeramente gracias a las propiedadeselectroquímicas de los pigmentos que presentan las plantas.
El pigmento más abundante y conocido es la clorofila, existiendo dos tipos, clorofila a y clorofila b, encargadas de entregar el color verde característico de las plantas. Los Pigmentos vegetales, que se encuentran en los cloroplastos, son moléculas químicas que reflejan o transmiten la luz visible, o hacen ambas cosas a la vez [2]. Si bienes cierto, no todas las plantas son verdes y según la estación del año, ontogenia, tipo de tejido, luz y frío, cambia la coloración de ellas, es porque la clorofila se va degradando, exhibiendo los otros pigmentos que existen en menor cantidad, como los pigmentos “accesorios”, que son sobrelapados con el color clorofila. Estos pigmentos (xantofilas, carotenos, entre otros) poseen la capacidad deabsorber a longitudes de onda diferentes a la máxima absorción de la clorofila. Además, existen pigmentos disipadores de calor como las xantinas (anteraxantinas, xeaxantinas y violaxantinas) que tienen como función principal la disipación del exceso de energía en forma de calor, especialmente en hojas que están expuestas a elevada intensidad lumínica [3]. El objetivo de esta actividad práctica eslograr la separación e identificación de los diversos pigmentos que presentan especies vegetales provenientes de distintas condiciones lumínicas y estado de desarrollo (senescencia foliar).
El estudio de los pigmentos se puede realizar a través de cromatografía en capa fina, que es una técnica de análisis versátil y fácil de realizar, colocando la muestra sobre un soporte (fase estacionaria) yluego sobre este soporte se aplica un solvente (fase móvil). Esta técnica se basa en la propiedad de la capilaridad de los líquidos, permitiendo separar los distintos pigmentos que contiene una planta y poder establecer que tipos de pigmentos están asociados a una planta específica [6,7]. Para llevar a cabo el procedimiento, es relevante tener en cuenta que los pigmentos presentan un grado diferentede solubilidad en disolventes apolares, lo que permite suseparación. Cuando un extracto de pigmentos se somete a una separación en una columna de cromatografíaen capa fina (TLC) con un disolvente orgánico, las sustancias más solubles se desplazarán a mayor velocidad, pues acompañarán fácilmente al disolvente a medida que éste avanza y consecuentemente las menos solubles avanzaránmenos en lacolumna.Por lo tanto, se espera observar varias bandas de diferentes colores, dependiendo del origen del extracto. Estas bandas poseerán diferente grosor, dependiendo de la abundancia del pigmento en la disolución [4, 5].






Materiales y métodos
Materiales:
Mortero
Acetona 80%
Papel filtro
Pipeta pasteur
Tubos eppendorf
Centrifuga
Tips (utilizados para sembrar en el capilar)Cromatofolio
Envase de vidrio (cámara cromatográfica) y papel alusa
Disolvente (mezcla de éter de petróleo/ acetato de etilo/ éter etílico de proporción 3:1:1, respectivamente)
Hojas: acanto, musgo, helecho, hoja color rojo, amarillo y café.
Métodos:
a) En un mortero se muele cada hoja por separado, agregándole 3 mL de acetona 80%. Una vez terminada la extracción de los colorantes, se vacoleccionando el líquido en un tubo eppendorf. Luego, con el objetivo de sacar el resto sólido de hoja se centrifuga a 12000 x 1 minuto y se recolecta el sobrenadante, envolviéndo el tubo en papel alusa para evitar que los pigmentos reaccionen con la luz.
b) Una vez hecho el procedimiento en “a” con cada tipo de hoja, se realiza la cromatografía en capa fina. Con un tip se extrae una porción de cada...