practica 4 articulo nitrato

Complejo nitrato reductasa de Escherichia coli K-12: La participación de los componentes específicos formiato deshidrogenasa y citocromo b, en la reducción del nitrato.
Se estudió la participación de deshidrogenasas formiato y distintos componentes del citocromo en la reducción de nitratos por Escherichia coli. La actividad formato deshidrogenasa presente en los extractos preparados a partir decélulas inducida nitrato de tensión HfrH estuvo activo con varios receptores de electrones, incluyendo azul de metileno, metosulfato de fenazina y viológeno bencilo. Ciertos mutantes que son incapaces de reducir el nitrato tenían niveles bajos o indetectables de ensayo de actividad de formiato deshidrogenasa de metileno con metosulfato de fenazina azul o como aceptor de electrones. De nueve deestos mutantes, cinco gas producido cuando se cultiva en condiciones anaerobias sin nitrato y poseía una actividad de formato deshidrogenasa ligada viológeno bencilo, lo que sugiere que deshidrogenasas formiato distintos participan en los sistemas hydrogenlyase fórmico nitrato reductasa y. Los otros cuatro mutantes formaron poco gas cuando crecido anaeróbicamente en ausencia de nitrato y carecía dela bencilo viológeno ligado formiato deshidrogenasa, así como la actividad metosulfato ligado azul de metileno o fenazina. El b1 citocromo presente en las células inducida por nitratos se distingue por sus propiedades espectrales y su control genético de los componentes principales del citocromo b1 de las células aeróbicas y de las células cultivadas anaeróbicamente en ausencia de nitrato. Elcitocromo bk-nitrato específica fue completa y rápidamente reduce en 1 mm formiato pero no se redujo en un 1 mm nicotinamida adenina dinucleótido reducida; ascorbato reduce sólo parte de la citocromo b1 que se redujo por formiato. Cuando se añadió nitrato, el citocromo b1 formiato-reducido se oxida con cinética bifásica, pero el citocromo bk ascorbato-reducido se oxida con una cinética monofásicos.Los efectos inhibitorios de n-heptilo hidroxiquinolina-N-óxido en la oxidación de b1 citocromo por nitrato proporcionan evidencia de que el citocromo-nitrato específica se compone de dos componentes que tienen diferentes potenciales redox pero las propiedades espectrales idénticas. Llegamos a la conclusión de estos estudios que la reducción de nitrato en E. coli está mediada por el funcionamientosecuencial de una deshidrogenasa específica formiato, dos citocromo b específica, los componentes, y la nitrato reductasa. Un número de observaciones indican que la reducción de nitrato en Escherichia coli se produce principalmente por una vía que implica formiato deshidrogenasa, bl citocromo, y la nitrato reductasa. Entre los diversos sustratos que son metabolizados por E. coli, formiato es eldonante de electrones más eficaz para la reducción de nitrato en las células cultivadas anaeróbicamente en presencia de nitrato (2, 23). En tales células, formiato deshidrogenasa, b1, y citocromo reductasa de nitrato son inducidos a niveles relativamente altos en comparación con los de las células cultivadas en ausencia de nitrato de (2, 17, 23) .Estas tres componentes están presentes en fracciones demembrana (6) y han sido parcialmente purificado como una unidad a partir de extractos de células (8). Por último, los mutantes de E. coli que son incapaces de producir nitrito de nitrato (mutantes NR7) carecen ya sea formato deshidrogenasa o nitrato reductasa o combinaciones de estas actividades y el citocromo b y (1, 16, 17, 22). La propuesta que deshidrogenasa y citocromo bi formiato soncomponentes específicos del sistema de reducción de nitratos plantea algunas cuestiones importantes relativas a la relación de esta vía con otras vías de transporte de electrones en E. coli. Formiato deshidrogenasa debe ser también un componente del sistema de hydrogenlyase (15), así como de la oxidasa formiato. Estas funciones múltiples de la formiato deshidrogenasa han sido previamente reconocido, y...