Practica De Curva De Calibracion Hb

CUENTA DE ERITROCITOS
OBJETIVO
Aprender a realizar un recuento de Eritrocitos por milímetro cúbico de sangre, interpretar el resultado, así como adiestrarse en el manejo de la cámara de Neubauer y la pipeta de Thoma
FUNDAMENTO
Para el conteo de eritrocitos, se usan métodos sistemáticos que son más rápidos y precisos, y los métodos manuales.
Todo método manual de recuento celular incluye 3fases:
ü Dilución de la sangre
ü Muestreo de la sangre diluida en un volumen
ü Recuento de células en ese volumen
Una suspensión celular se caracteriza por presentar un número de partículas microscópicas dispersas en un fluido. Habitualmente será necesario determinar tanto la densidad de las células en la suspensión como el porcentaje de éstas que son viables.
Para determinar la densidad delas células se emplean diferentes técnicas, desde la relativamente simple cámara de contaje celular de la que existen numerosas variantes, entre ellas la que utiliza la cámara de Neubauer
Para el conteo de eritrocitos, es necesario diluir la sangre con el líquido de Hayem, en una proporción exacta. Luego se examina en el microscopio con una cantidad pequeña colocada en la cámara de Neubauer,contando el número de elementos que se encuentran en el retículo de la cámara y mediante una operación se obtiene el número total.
Para la realización del conteo manual se necesita un líquido de dilución, una cámara de recuento, una pipeta diluidora y un microscopio.
MATERIAL
v Pipeta de Thoma para glóbulos rojos (perla roja)
v Equipo para venopuncion (Tubo lila)
v Boquilla roja
v Tubo deplástico
v Tubos de ensayo
v Papel parafin
v Cámara de Neubauer
v Cubrehematimetro
v Microscopio
v Gasas
SUSTANCIAS
Ø Alcohol al 70%
Ø Sangre venosa
Ø Liquido de Hayem
PROCEDIMIENTO
1. Una vez seleccionada, se desinfecta la zona con alcohol al 70%, y se practica punción venosa. La sangre es recogida en un tubo lila con EDTA
2. Colocar el tubo de plástico y la boquillapara aspirar en la pipeta


3. Llenar la pipeta de glóbulos rojos con sangre hasta la marca 0.5 para realizar una dilución de 1/200, y si se carga hasta 1, la dilución será 1/100. Limpiar la punta con gasa o papel absorbente. Si la sangre se pasa de la marca, se puede absorber con gasa el excedente

4. Introducir la pipeta en el tubo o frasquito que contiene el diluyente (Hayem) y llenarde líquido de dilución hasta la marca de 101

5. Se tapa la punta con papel parafin y se coloca en un rotador automático o se hace rotar manualmente de 2-3 minutos

6. Destapar la pipeta y descartar 3 a 4 gotas del tallo, luego colocar una gota pequeña cerca de un extremo de la cámara para que por capilaridad se llene exactamente. Dejar 2 minutos que los eritrocitos se sedimenten

7.Colocar en la platina del microscopio y enfocar la cuadricula a 10x. luego con el objetivo de 40x contar sobre el cuadro grande central de la cámara solo en 5 cuadrados pequeños: uno central y cuatro angulares (80 cuadritos del total)

8. En el recuento se incluyen las células que cubren o tocan por dentro o por fuera las líneas limitantes superior e izquierda en el cuadro pequeño derecuento y no se consideran los que estén en los límites inferior y derecho.
OBSERVACIONES

Cámara de Neubauer, 10x
El rayado de la cámara de Neubauer cubierta de miles de eritrocitos, que destacan por su forma redonda y gran cantidad.

Cámara de Neubauer, 40x
Enfocando el cuadro central de los cuadros pequeños, se aprecian claramente los 16 cuadritos pequeños donde se tienen que contar loseritrocitos que hay en ellos.
RESULTADOS
Los recuentos de eritrocitos se expresan como concentraciones, que en este caso serían número de células por unidad de volumen de sangre, que es 1mm3
Después de contar los hematíes de los 5 cuadrados pequeños, se suman y con dicha cantidad de hace el siguiente cálculo:
N° de hematíes x mm3 = altura x dilución x área
N° de hematíes x mm3 = 1/10 x...