Practica De Laboratorio De Bioquimica 5

UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE CIUDAD JUÁREZ
INSTITUTO DE CIENCIAS BIOMÉDICAS
BIOQUÍMICA
Practica 5
Reacciones de identificación de aminoácidos


Objetivo:
Aprender a diferenciar aminoácidos a través de técnicas colorimétricas tales como la prueba de Sullivan, la identificación de fenoles y la reacción de identificación de aminoácidos con ninhidrina.
Introducción:
Los aminoácidos sonestructuras conocidas como monómeros que dan lugar a las proteínas que son polímeros, en general los aminoácidos se dividen en esenciales y no esenciales, siendo los primeros los que no se encuentran en el cuerpo humano y deben ser ingeridos de los alimentos para obtenerlos. Los principales son: fenilalanina, leucina, lisina, metionina, isoleucina, treonina, triptófano y valina.
Los no esencialespueden ser sintetizados por el cuerpo humano y por ende no es necesario ingerirlos en la dieta diaria.
20 Aminoácidos son las principales estructuras de las proteínas, y poseen las siguientes características: Tienen un carbón que recibe el nombre de carbono alfa o centro quiral, al que se le unen cuatro radicales; un grupo carboxilo (COO -), un átomo de hidrógeno (H), un grupo amino (+NH3), y unradical que sirve para reconocer a cada aminoácido, se representa con(R).
Como ya se mencionó anteriormente los aminoácidos que sintetizan proteínas son 20 y por eso se les considera naturales, los no naturales son aminoácidos que no se utilizan en la síntesis de proteínas.
Para reconocer los aminoácidos se utilizan múltiples pruebas entre las cuales están la de Sullivan, la de identificaciónde fenoles y la reacción de identificación de aminoácidos por Ninhidrina.
La prueba de Sullivan es utilizada comúnmente para el reconocimiento de Cisteina y Cistina. Y consiste en aplicar
La reacción de identificación de aminoácidos por Ninhidrina es una reacción en la que la Ninhidrina descarboxila por oxidación a los alfa-aminoácidos a CO2 y NH3 y un aldehído con un aminoácido menos queel aminoácido precursor. La Ninhidrina que se redujo pasa a reaccionar con el amoniaco que se liberó de la reacción con lo que se forma el color azul. Como excepción la Prolina la 4-hidroxiprolina reaccionan pero dan un color amarillo.
La prueba de fenoles
Material de laboratorio:
1.- 15 tubos de ensayo
2.- 1 gradilla
3.- 5 pipetas de 1.0 ml
4.- 4 pipetas Pasteur
5.- 1 pipetade 10.0 ml

Metodología y resultados:
Se toman 4 tubos de ensayo para la reacción de fenoles, se enumeran y el primero corresponde al blanco, la segunda es el patrón, la tercera es la muestra problema y la cuarta es la segunda muestra problema.
En el blanco se agregan con una pipeta 0.5 ml de agua, 2 gotas de Nitrosonaftol y se deja reposar, en el patrón se agrega con una pipeta 1.0ml de tirosina, 2 gotas de Nitrosonaftol y se deja reposar, al tercer tubo de ensayo se le agrega con una pipeta 1.0 ml de muestra problema, 2 gotas de Nitrosonaftol y se deja reposar, al cuarto tubo de ensayo se le agrega con una pipeta 1.0 ml de la segunda muestra problema, y 2 gotas de Nitrosonaftol. Al tener los 4 tubos de ensayo con sus respectivas cantidades se procede a ponerlos a baño mariadurante 5 minutos. Al finalizar los 5 minutos se le agra a cada tubo de ensayo 2 gotas de Ácido Nítrico, se agitan los tubos de ensayo y se observan los resultados.

REACTIVOS | BLANCO | PATRON | 1 PROBLEMA | 2 PROBLEMA |
AGUA | 1.0 | --- | --- | --- |
TIROSINA | --- | 1.0 | --- | --- |
PROBLEMA | --- | --- | 1.0 | 1.0 |
NITROSONAFTOL | 2 gotas | 2 gotas | 2gotas | 2 gotas |
Después de poner a baño maría por 5 minutos.
ACIDO NITRICO | 2 gotas | 2 gotas | 2 gotas | 2 gotas |
RESULTADOS | Amarillo | Rojo-rosa | Rojo-rosa | Amarillo |

Violeta- rosa positivo.
Continuamos con la reacción de Ninhidrina y proseguimos a tomar 4 tubos de ensayo y a numerarlos 1 para blanco, 2 para...