PRACTICA No 4 Gram


PRACTICA No 4

TEMA: MICROSCOPIO.- TINCION SIMPLE Y TINCION DOBLE Y DIFERENCIAL: TECNICA DE GRAM

COMPETENCIAS:

Aprender a realizar un frotis o extendido y diferentes tipos de fijación
Realizar una tinción simple
Diferenciar la disposición y agrupación de los microorganismos
Realizar la técnica de Gram
Diferenciar los microorganismos Gram positivos de los Gram. negativos observando laslimitaciones de la tinción en cultivos en la fase estacionaria
Adquirir destreza en el manejo del microscopio


MARCO TEÓRICO:

La morfología bacteriana se puede ser estudiada de dos formas distintas:

1. Por visualización de los microorganismos vivos sin teñir, lo que nos permite además observar su posible movilidad
2. Por visualización de los microorganismos teñidos mediante colorantes, con unaconcentración tal que hacen morir a la bacteria y no permiten observar su movilidad, pero sin embargo se mejora notablemente la visualización de su morfología y otras estructuras según el tipo de tinción llevada a cabo.

En general las bacterias vivas son prácticamente incoloras, no presentando suficiente contraste en el medio acuoso donde estas se presentan suspendidas, con lo cual no pueden serobservadas con claridad. Pero si se tiñen se producen una gran contraste con respecto al medio que las rodea. Además algunos de estos colorantes pueden también teñir estructuras internas de la bacteria, lo que nos sirve para su identificación

Por todo esto las principales ventajas, de la técnica de tinción son:

observar más adecuadamente su morfología
proporcionar el contraste preciso y suficiente encada caso, lo que permitirá diferenciar distintos tipos morfológicos
establecer una información complementarias sobre su estructuras internas y/o externas que no podrían ser observadas por examen en fresco
conocer su características tintoriales orientándolos hacia un grupo taxonómico u otro en la clasificación bacteriana




BACTERIAS
CARACTERISTICAS
TIPOS DE AGRUPACION
Cocos (esféricas)
Formaesférica o casi esférica ya que sus diámetros (largo y ancho) son casi iguales

Células agrupadas en Pares (Diplococos)
Células agrupadas en
cadenas cortas y largas
(estreptococos)
Células agrupadas en forma de racimo (estafilococos
Bacilos o Bastones (cilíndricas)
Tienen uno de los ejes o diámetro notablemente mayor que el otro, de tal manera que se observan como bastoncitos dediferente ancho y longitud.
Sin agrupación o agrupación irregular
Células aisladas en parejas
Células en cadenas
Disposición celular, una al lado de la otra
Helicoidales o curvas (Espirales)
Generalmente de presentación aislada; las células son muy largas en relación a su ancho y se observa una torsión alrededor de su eje (espiras).
No se tienden a agrupan
Elaborado por: QF. Mariana Rendón MMSc.













TINCION SIMPLE


MATERIALES
MEDIOS DE CULTIVO/CEPAS
REACTIVOS
EQUIPOS
Algodón
Caldo nutritivo
Alcohol
Mechero
Fósforos
Cepas varias
Azul de metileno
Microscopio
Gasa

Safranina

Placas portaobjetos

Violeta de genciana

Asa de inoculación

Aceite de cedro

Papel filtro



Elaborado: Mariana Rendón M MSc.

PROCEDIMIENTO
FROTIS
Se saca la placa portaobjeto del recipienteen que esta almacenas y se seca con una gasa, se rotula el número de muestra con el lápiz graso. Se agrega con el asa estéril 1 0 2 gotas de agua destilada o caldo nutritivo estéril. Se toma con el asa de siembra la muestra y se extenderá de forma uniforme.
Si la muestra problema es líquida se tomará con el asa estéril una o dos gotas y se añadirá al portaobjetos extendiéndola uniformemente con elasa de siembra
FIJACION
Dejar que la muestra en el portaobjeto se seque al aire y una vez seca, si la muestra es solida se fijará con calor, haciendo pasar por ello la extensión de 2 a 3 veces por la llama del mechero, ayudándonos con pinzas si fuera necesario.
Si es liquida, se debe agregar metanol y dejar secar al ambiente
TINCION
Ya realizado el frotis se pondrá este en la rejilla de...