Preparaciones Microbiologicas

Preparaciones microbiológicas

Objetivos

Al finalizar esta práctica el alumno será capaz de:
* Realizar diferentes preparaciones microbiológicas a partir de muestras naturales y cultivos puros.
* Describir las características morfológicas y de locomoción de microorganismos que se encuentran en muestras naturales.
* Realizar frotis fijos y tinciones simples.
* Identificar ydescribir las características morfológicas y de agrupación de bacterias y hongos levaduriformes.
* Identificar y describir las características microscópicas y tintoriales de las bacterias.
* Localizar y describir endosporas y cápsulas bacterianas.

Introducción

El tamaño de los microorganismos impide detectarlos a simple vista, por lo que es esencial el uso del microscopio. Para que unobjeto pueda ser percibido a través del microscopio, este debe poseer cierto grado de contraste con el medio circundante. Para aumentar el contraste de los microorganismos y lograr una mejor observación de los mismos, se emplean diferentes técnicas de tinción, las cuales se basan en la capacidad de los microorganismos para retener (o no) ciertos colorantes lo que depende de la carga de la célulay del colorante.

La reacción a la tinción de Gram y de Ziehl-Neelsen se basa en la composición y estructura de la pared celular, que determina que unas bacterias retengan el primer colorante, en tanto que otras lo pierdan, lo que les permite reaccionar con el colorante de contraste. Las tinciones selectivas son aquéllas que permiten observar un organelo celular determinado. Algunas bacteriastienen la capacidad de producir endosporas y cápsulas. Los primeros son organelos de resistencia que se caracterizan por presentar una capa externa formada por un complejo de calcio, ácido dipicolínico y peptidoglicano. Debido a esta composición, es muy difícil que los colorantes penetren, por lo que al aplicar una tinción simple, estas aparecen como cuerpos incoloros (dentro o fuera de la célula).No obstante es posible teñirlas mediante la aplicación de métodos drásticos. Respecto a la cápsula, esta es una cubierta extracelular constituida por agua y polisacáridos que se acumulan alrededor de la célula. Estos componentes no se combinan con los colorantes, por lo que para la observación de la misma se emplean tinciones negativas con las que se oscurece el fondo y de esta manera secontrastan las cápsulas.

Materiales

Muestras:
Agua de charco
Pulque
Alimento en estado de descomposición
Cultivos puros de las siguientes bacterias y un hongo:
Bacillus sp.
Micrococcus luteus
Serratia marcescens
Staphylococcus sp.
Streptococcus sp.
Saccharomyces cerevisiae

Material por equipo:
Microscopio
Aceite de inmersión
Pipetas Pasteur con bulbo
Preparaciones fijas
Frascosgotero con azul de metileno, safranina, cristal violeta

Material que deben tener los alumnos:
Mecheros
Asas bacteriológicas
Portaobjetos excavados
Portaobjetos
Cubreobjetos
Charola para tinción
Puente de vidrio
Piseta
Pinzas de madera para ropa
Paño limpio de algodón
Papel seda
Palillos
Vaselina sólida
Frasco con una solución de sanitizante para desechar preparaciones

MetodologíaLavar y desengrasar los portaobjetos y cubreobjetos. Para ello emplear jabón líquido y agua; enjuagar varias veces con alcohol al 95%, ponerlos a secar al aire a temperatura ambiente y flamearlos de 2 a 3 veces.

2.2.1 Preparaciones húmedas

1. Con una pipeta Pasteur colocar una gota de la muestra (agua o de pulque) en el centro del portaobjetos, cubrir la gota con un cubreobjetos.2. Observar al microscopio con los objetivos de 10x y 40x. Nunca con el objetivo de inmersión.
3. Esquematizar la morfología y movimiento de los microorganismos observados (Figura 1).

2.2.2 Gota pendiente

1. Con un palillo colocar un poco de vaselina alrededor de la concavidad del portaobjetos excavado.
2. Con una pipeta Pasteur tomar una gota de la muestra y colocarla en el...