Procedimiento Tincion Gram

Tinción de Gram
•Desarrollada

por el bacteriólogo Christian
Gram en 1884
•Permite la rápida evaluación de morfología
y complejidad bacteriana
•Tinción rápida y Económica
•Puede variar según elprotocolo usado
(necesidad de estandarizar el protocolo)

Reactivos Necesarios
Portaobjetos
 Agua destilada
 Pipetas Pasteur, haza, Mechero.
 Cristal Violeta
 Lugol
 Alcohol acetona
 Safranina (uotra tinción de contraste)


Procedimiento: Fijación
Colocar una pequeña gota de Agua
destilada en el portaobjetos (con pipeta por
ejemplo)
 Re-suspender muestra en el portaobjetos.
Secar almechero.


La gota de agua debe
ser pequeña

Se debe calentar por 5
min aprox, hasta que
toda el agua se seque.

Procedimiento: Tinción
Se debe colocar Cristal Violeta cubriendo
toda la muestra por 1min(variable según
lab.)
 Se lava con agua corriente


Puede hacerse con
gotario o pizeta

Procedimiento: Tinción


Luego debe agregarse el lugol. Este debe
aplicarse como el cristal violeta y tambiéndebe cubrir la muestra por 1 min. Luego se
lava con agua corriente.

Procedimiento: Tinción


El cubrir la muestra con alcohol acetona
para decolorarla es el paso más critico del
procedimiento. Estedebe cubrir la muestra
por el tiempo que puede ir de 15s a 30s
según corresponda y la reacción debe ser
detenida con el lavado con agua corriente.
El tiempo debe ser el mismo para todas las
muestras.Al ser tiempos por lo
general muy cortos, se
recomienda agregar el
alcohol mientras ya se
tiene la llave del agua
corriendo, listo para el
lavado.

Procedimiento: Tinción


El último paso consisteen agregar una
tinción de contraste, para teñir las bacterias
que pierden el cristal violeta. Para esto se
agrega safranina cubriendo la muestra por
15s o por 1min, dependiendo. Luego se lava
con aguacorriente y se deja secar.

Resultados: Microscopía


Bacterias Gram positivas:
◦ Corresponden a las bacterias que mantienen la
coloración del cristal violeta después del alcohol
acetona, lo que...