Procedimientos histologicos

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OBJETIVO

1. El alumno conocera la importancia de la preservación de los tejidos para su estudio histológico.

2. Capacitarse de procedimiento del material histológico y en la realización de coloraciones de rutina y especiales.

DESARROLLO

Los métodos histológicos abarcan varios procedimientos a los que se somete el tejido, para empezar con la técnica histológica se debe obteneruna muestra de tejido. Los especímenes para estudio histológico son producto de resección quirúrgica o de necropsia. En este caso el tejido será obtenido de un animal experimentación. El grosor del tejido es de 0.5 cm, el diámetro varía dependiendo del órgano estudiar.

I. FIJACIÓN

Los tipos de fijación son variados y dependen del tejido, algunos funcionan deshidratando los tejidos como sonlos alcoholes (etanol, metanol), o combinados con ácidos. El tiempo de fijación oscila entre 3 minutos a 12 horas dependiendo del grosor del tejido, las células libres requieren sólo 30 minutos, el tejido delgado de 2 horas y el más grueso hasta de 12 horas, entre más delgado sea el tejido, mejor fijará.

II. DESHIDRATACIÓN

Para llevar a cabo la deshidratación se utilizarán agentesdeshidratantes como lo son: alcohol etílico, alcohol metílico, dioexano, estos deben de utilizarse graduaciones de menor a mayor concentración, en la práctica se utilizará alcohol al 80%, alcohol 96%, alcohol absoluto.

III. ACLARACIÓN O DESALCOLIZACIÓN

Este proceso permite que el alcohol de los tejidos sea reemplazado por una sustancia en miscible con el medio de inclusión que se va a utilizar(parafina), ya que lo que se pretende es que el tejido se encuentre embebido con un agente químico líquido, el cual puede moverse por medio de inclusión y así penetrar en el tejido. Existen diferentes agentes declaración como lo son: benceno, xileno, éter de petróleo, tolueno, cloroformo, etc. En este caso utilizaremos xilol.

IV. INFILTRACIÓN O IMPREGNACIÓN

Este proceso tiene como objetorellenar o infiltrar completamente la muestra histopatológica con del medio que será utilizar para embeber el tejido. El método preferido a seguir es la utilización de la parafina. La parafina debe de tener un punto de fusión entre 56° - 58° C.
V. INCLUSIÓN

Ya que los tejidos son estructuras blandas y frágiles incluso después de la fijación, previa la obtención de los cortes es necesarioincluirlos en un medio de soporte. Los medios más utilizados son las ceras o resinas, otro método alternativo es la congelación rápida del tejido en un medio gelatinoso.

1. Se coloca la muestra del tejido en un recipiente y se le agrega la parafina fundida 60 °C.

2. Colocando la muestra en una estufa de 30 minutos a 6 horas manteniendo la temperatura 60 °C.

3. Después se coloca lapieza y un poco de parafina fundida en un molde de papel, escuadras o moldes de acero inoxidable de forma rectangular y se debe de solidificar a temperatura ambiente, formándose un bloque sólido de parafina con el trozo del tejido incluido.

VI. CORTE

La mayor parte de los preparados para microscopía óptica tienen un grosor entre 3 a 5 micrómetros. Para estos cortes se utiliza un aparatollamado micrótomo existen diferentes tipos de micrótomos entre ellos tenemos:

a) Micrótomo de congelación

b) Vibratomo

c) Micrótomo de deslizamiento o rotatorio

d) Microscopía eléctrica

TINCIÓN

Las técnicas de tinción varían de acuerdo la estructura observar, hay colorantes básicos, ácidos proteicos, bicromatos o fluorescentes. Es indispensable que las muestras seantransparentes o muy claras y como utilizaremos microscopios compuestos tenemos que colorear y contrastar. Para teñir un corte de parafina, previamente eliminamos la parafina, ya que es insoluble en agua y lo hacemos con solventes orgánicos como xilol. En nuestro caso desparafinamos con xilol 2 veces 5 minutos cada vez.

1. Procedemos a la deshidratación que se hace con alcohol, utilizamos...
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