Prueba Confirmatoria Para Vih

PRUEBA CONFIRMATORIA PARA VIH DE WESTERN BLOT
Práctica No. 4
Introducción
Es una técnica muy sensible que permite identificar Antígenos y Anticuerpos. La técnica de Western Blot se basa en laseparación electroforética de proteínas en geles de poliacrilamida, la transferencia (blotting) de dichas proteínas a un soporte sólido (membrana de nitrocelulosa o nylon) y la posterior detección deuna o más bandas identificadas por Anticuerpos específicos. La migración de las proteínas se realiza en presencia de detergentes (Dodecil Sulfato de Sodio, SDS) a fin de que su migración dependafundamentalmente de peso molecular (PM) de los péptidos. Así descripta, la técnica permite investigar la presencia de un antígeno dado en una mezcla de proteínas presentes en una determinada muestra y paraello se debe disponer del Ac específico para marcar la membrana. Sin embargo, la técnica de Western Blot es también muy útil para la detección de Acs específicos en sueros. Si se desea detectar Acsespecíficos, debe contarse con el Ag de interés separado por electroforesis y transferido a una membrana, la cual se incubará con el suero a analizar. Posteriormente esa membrana deberá incubarse con elsegundo anticuerpo marcado con la enzima para poder detectar las bandas específicas. La técnica de Western Blot para determinar la especificidad de los Acs contra Ag del virus de HIV es la pruebaconfirmatoria de elección para los casos en que los sueros de los pacientes dieron un ELISA positivo
Las proteínas constitutivas del virus se fijan y son expuestas al suero del paciente, en el cual losanticuerpos específicos se unen a las proteínas presentes dando un patrón de bandas, cuya interpretación depende del criterio que se adopte en el laboratorio de acuerdo con lo definido por organismosinternacionales, los cuales se presentan en la siguiente tabla.

El resultado de la prueba de Western blot se informa como negativo cuando hay ausencia total de bandas; como indeterminado,...