Prueba65

MICROBIOLOGIA AMBIENTAL GUIÓ DE PRÀCTIQUES (10 Hores) PROFESSOR TUTOR: Rosa Carbó Moliner Objectius: - Aprendre a treballar en un laboratori de microbiologia - Familiaritzar-se amb les tècniques bàsiques de microbiologia destacant la importància de: l’aïllament, el recompte, la determinació de grups (marcadors microbians) i la identificació microbiana. Primera sessió (4 h) 1- normes de seguretatespecífiques del laboratori de microbiologia 2- funcionament i ús d’aparells (autoclau, cabina flux laminar, lupa ...), material (nansa sembra, pipeta, placa Petri, ..). 3- conceptes: neteja, desinfecció i esterilització. 4- preparació de medis de cultiu: a) líquids i sòlids, b) generals, selectius i diferencials i c) definits i complexes 5- aïllament i recompte de microorganismes: a. dilucions isembra en massa (per abocament) b. esgotament en placa c. filtració a través de membrana Segona sessió (3 h) 1- observació de las plaques sembrades en la sessió anterior (dilucions i sembra en massa, esgotament i filtració ) 2- tincions microscòpiques: tinció gram de les colònies crescudes 3- tinció d’espores 4- proves bioquímiques d’identificació de microorganismes (enterobacteriacies) Tercerasessió (3h) 1- lectura de les proves bioquímiques d’identificació 2- preparacions microscòpiques de fongs, llevats i protozous 3- recompte amb la càmara compta cel.lules. NORMES BÀSIQUES EN EL LABORATORI DE MICROBIOLOGIA. En el laboratori de microbiologia s’han de seguir unes normes estrictes d’higiene i seguretat per evitar que es doni contaminació creuada; s’ha d’evitar que microorganismesprocedents de l’ambient o del mateix manipulador contaminin el nostre cultiu o al revés. En el laboratori és necessari portar bata de treball; aquesta serà d’us exclusiu per aquest laboratori. Abans d’iniciar i també al finalitzar el treball de microbiologia és necessari rentar-se les mans. No s’ha de menjar ni beure dins del laboratori. La taula

de treball ha d’estar neta i ordenada des de l’inicide la pràctica fins al final (abrics, bosses, objectes personals…han d’estar allunyats del lloc de treball) Respecte a les precaucions a nivell operatori o pràctic, és necessari: 1. Utilitzar sempre material estèril. 2. Treballar sempre prop de la flama, en un espai delimitat per un radi d’uns 15 centímetres al voltant del bunsen. La segona opció és treballar en cabina de flux laminar. 3. Lasnanses de sembra reutilitzables es flamegen sempre fins arribar al roig viu abans i després de ser utilitzades (és necessari tenir la precaució d’esperar uns segons a que es refredin abans d’usar-la) 4. Les plaques petri, suport de pipetes estèrils i altre material que es vulgui preservar de qualsevol contaminació sols s’obrirà al costat de la flama i el temps necessari per la seva manipulació. 5. Lespipetes estèrils no es toquen mai per la punta, i un cop utilitzades, es deixen en solució desinfectant (sabó, llexiu...); mai és deixen sobre la taula de treball (evitar contaminació de la taula, i possibilitat de contaminació del mateix usuari). 6. Per sembrar microorganismes procedents d’un tub d’assaig a un altre, es procedeix mantenint el tub lleugerament inclinat però sense que el líquidtoqui el tap. Es treu el tap al costat de la flama, i el tap s’aguanta amb el dit petit de la ma amb la que s’ha obert el tub. Es flameja la boca del tub i s’introdueix la nansa esterilitzada (o pipeta estèril) s’agafa mostra i es passa al segon tub. Abans d’obrir el segon tub, es flameja la boca del primer y es tapa. 7. Para sembrar microorganismes de placa a placa, s’aconsella i vertir la posicióde les plaques i n manipular, al costat de la flama, sols la base de la placa. 8. És necessari etiquetar adequadament el material (tubs, plaques) 9. L’espai de la taula on es realitzen les sembres s’ha de netejar i desinfectar abans i després de treballar. MEDIS DE CULTIU. Constitueixen el suport en el que es fan créixer els microorganismes en el laboratori. Els medis de cultiu contenen tots els...