Purificación de globulinas

Se adicion gota a gota 5mL de solucin saturada de (NH4)2SO4 para tener 1/3 de saturacin de sal neutra. Una vez que se adicion todo el (NH4)2SO4, se ajust el pH a 7.8 con NaOH 2N. 3 FASE. Dilisis. Seelimin el (NH4)2SO4 mediante dilisis con PBS, cambiando sta solucin cada 12-24 h. Se continu con el proceso de dilisis hasta que el dializado dio negativo a la reaccin para sulfatos, que consiste enagregar unas gotas de BaCl2 al 10 a una muestra del dializado y si se forma un precipitado blanco de BaSO4 la dilisis an no ha terminado. Despus de la precipitacin, es necesario retirar el agenteprecipitante. Un mtodo es la dilisis, que se llev a cabo colocando la muestra dentro de una bolsa de membrana semipermeable, y sta bolsa la sumergimos en un frasco con solucin de PBS. La difusin de losmateriales hacia adentro y hacia afuera de la bolsa de dilisis permite reducir la concentracin de la sal precipitante, disolver la protena, as como cambiar la solucin en la que originalmente estaba laprotena. Anlisis de Resultados Conclusiones El uso de altas concentraciones de electrolitos tales como sulfato de amonio para la separacin de protenas por precipitacin diferencial es un mtodo utilizadopara purificar anticuerpos parcialmente debido a que puede quedar contaminado con otras protenas de alto peso molecular, para mayor eficiencia es recomendable combinarlo con otras tcnicas comocromatografa de intercambio inico o exclusin molecular. Cabe mencionar que el mtodo de precipitacin por salado es sencillo y econmico. - Minimizar la manipulacin de la muestra para no contaminarla o reducirsu rendimiento. - Remover al inicio del proceso los posibles contaminantes. - Reducir el uso de aditivos, debido a que el uso de muchos aditivos como sales y amortiguadores aumentan el costo de lapurificacin, por eso se debe seleccionar y utilizar slo lo necesario. - Usar diferentes tcnicas, para esto se deben tomar en cuenta las propiedades fisicoqumicas como tamao, carga, hidrofobicidad, etc....