Reacciones de precipitación en capilar (fase liquida)




FACULTAD DE CIENCIA Y TECNOLOGÍA
QUIMICO FARMACÉUTICO BIOLOGO

Laboratorio de inmunología general

4° Semestre

Practica 2
Reacciones de precipitación en capilar (fase liquida)



INTRODUCCION
La precipitación de los complejos antígeno-anticuerpo en solución, ha sido utilizada desde 1920 para la cuantificación de antígenos y anticuerpos. Las reacciones en geles fueronutilizadas primero para estudios inmunoquímicos a mediados de la década de 1940, cuando Oudin introdujo la inmunodifusión “simple” en una dimensión en tubos conteniendo gel de agar. El demostró que un sistema sencillo Ag-Ac daba lugar a una banda de precipitina y que la mezcla de sistemas en el mismo tubo daba bandas múltiples e independientes. Con estas observaciones, las reacciones de precipitina sedesarrollaron tanto cualitativas como cuantitativas.
Los precipitados inmunológicos son complejos insolubles formados por la unión de anticuerpos (precipitinas) y antígenos (precipitinógenos) que se encuentran en solución. Para la formación de una malla de precipitado se requiere que tanto las precipitinas como los precipitinógenos sean al menos bivalentes.
Esta reacción tiende a ocurrir másrápido con el aumento de la temperatura, aunque la precipitación más completa es obtenida usualmente a temperaturas bajas (0-4ºC). Está determinada por el fenómeno de zona, lo cual quiere decir que la máxima precipitación ocurre en un punto o zona de equivalencia que para poder ser visible es necesario determinar las proporciones óptimas de los reactivos. (paz, 2011)
Cuando la reacción se realiza enmedio líquido, la cantidad de precipitado varía según la proporción de los reactivos. Si se dispone de una serie de tubos capilares que contengan el mismo volumen de suero y cantidades crecientes de antígeno, puede observarse que el precipitado formado alcanza un máximo, después del cual, progresivamente, se encuentra una disminución en la cantidad de precipitado.
Si se analizan los sobrenadantesde todos los tubos, los correspondientes a los que presentan un máximo de precipitación prácticamente no tienen antígeno ni anticuerpos, en tanto, en los precedentes puede demostrarse la presencia de anticuerpos y en el resto, la presencia de antígenos. (correa, 2000)
Muchas modificaciones han surgido después del método de difusión de Oudin y probablemente las más usadas sean la inmunodifusióndoble y la inmunodifusión radial para estudios cualitativos y cuantitativos, respectivamente. La combinación de la electroforesis con la difusión ha resultado en métodos muy importantes, que serán tratados en otra práctica.
Todas las reacciones de precipitación están basadas en los mismos principios físico-químicos. Los aspectos básicos de exceso y de equivalencia de antígeno o anticuerpo son departicular importancia; de hecho, la relativa solubilidad de los complejos con un exceso significativo de cualquiera de los reactantes y la insolubilidad de los mismos en la zona cercana a la equivalencia (proporciones óptimas), son críticos para el proceso de visualización. La reacción de precipitación tiene base en la reacción fundamental antígeno-anticuerpo in vivo, ya que la formación de estecomplejo es el primer paso en la remoción de agentes infecciosos del cuerpo por el sistema inmune. Estos complejos forman precipitados que pueden ser depurados por diversos mecanismos. Los métodos en gel tienen significativamente mayor sensibilidad y mayor poder de resolución que las técnicas sin medio de soporte. Además, los geles actuales pueden ser fotografiados y almacenados, ya que losinmunoprecipitados insolubles que se forman en la zona de equivalencia, son atrapados permanentemente en la matriz del gel. (Romero, 2002)

OBJETIVO
Encontrar el punto de equivalencia del complejo antígeno-anticuerpo mediante precipitación en fase liquida en capilares realizando diluciones.
Evidenciar la reacción de precipitación que se lleva a cabo cuando hay interacción
Entre antígeno soluble...