Resumen de experimentos vistos en clase

Resumen de experimentos de Genética vistos en clase
Experimento de Griffith “Principio transformante”
En el año 1928, el microbiólogo Frederick Griffith,  investigando una enfermedad infecciosa mortal, la neumonía, estudió las diferencias entre una cepa de la bacteria Streptococcus pneumoniae que producía la enfermedad y otra que no la causaba. Descubrió que la cepa que causaba la enfermedadestaba rodeada de una cápsula de polisacárido que la protege del sistema inmune del ser que ha sido infectado, a la cual llamó cepa S (del inglés smooth: lisa), debido al aspecto de la colonia en las placas de Petri. La otra cepa llamada R, por el aspecto rugoso de la colonia en la placa de Petri, no tiene cápsula protectora, por lo que es atacada por el sistema inmunitario sin causar enfermedad.Griffith inyectó las diferentes cepas de la bacteria en ratones, analizando posteriormente sus tejidos para observar qué encontraba. Cuando inyectaba la cepa S a los ratones, éstos enfermaban y morían; mientras que los ratones que eran inyectados con la cepa R no enfermaban y vivían. Luego comprobó que la cepa S, muerta por calentamiento, no causaba neumonía cuando se la inyectaba a losratones. Sin embargo, cuando combinaba la cepa S muerta por calentamiento, con la cepa R viva, e inyectaba la mezcla a los ratones, los ratones contraían la neumonía y morían. Al analizar la sangre de estos ratones muertos en el microscopio, Griffith encontró neumococos vivos de la cepa S, en apariencia la cepa R se convirtió en cepa S. Es decir que, en las bacterias S muertas, había “algo” capaz detransformar a las bacterias R, antes inocuas, en patógenas y este cambio era permanente y heredable. Este fue uno de los primeros experimentos que demostró que las bacterias eran capaces de transferir “algo”, a lo que llamó Griffith principio transformante. Sin embargo, este hallazgo no pudo explicar la transformación bacteriana, pero sirvió de base para que en 1944 Avery, MacLeod, y McCarty,cultivaron cepa S y descubrieran que el principio de la transformación bacteriana era el ADN.



Experimento de Avery, McLeod y MacCarty
Identificación del Factor de Transformación
En 1944, Avery y su equipo comenzaron a experimentar usando tubos de ensayo en lugar de ratones. Usaron detergente para descomponerlas células de la cepa S lisas muertas por calor creando una lisis a partir de ellas. Entonces usaron esta lisis para los ensayos de transformación. Los tubos funcionaron bien y mostraron que la lisis de la cepa S muerta por calor podían cambiar cepas Rugosas (R) a Lisas (L). El principio transformador estaba en algún lugar de los fragmentos de la lisis celular.
Probaron cada uno de loscomponentes de la lisis para la actividad transformadora. Primero incubaron la lisis de cepa Lisa muerta por calor con una enzima, SIII, que consume completamente la cubierta de polisacáridos de la cápsula. La lisis de cepa lisa sin cubierta seguía siendo útil para la transformación. Esto les reveló que las cepas R no creaban una nueva cápsula a partir de las partes de la cápsula de cepa Lisa, entoncesdescartaron la cápsula como fuente de transformación. Luego incubaron la lisis de cepa Lisa sin cápsula con proteínas que digieren enzimas (tripsina y quimotripsina) y después probaron la habilidad de esta lisis para transformar. Esta lisis sin proteínas seguía trasformando, así que el principio trasformador no eran las proteínas.
Cuando querían probar y purificar la lisis, precipitaron los ácidosnucleicos (ADN y ARN) con alcohol. Fueron los primeros en aislar los ácidos nucleicos de un neumococo. Cuando vieron que el «principio» transformador no estaba en la cápsula de polisacáridos, ni en la proteína, sospecharon entonces que tal vez estaría en uno de los ácidos nucleicos.
Disolvieron la mezcla con alcohol en agua, primero destruyeron el ARN con la enzima RNasa, probaron la capacidad...