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LA CENTRIFUGACIÒN
La centrifugación es una técnica de sedimentación, acelerada gracias al uso de fuerza centrífuga. Se aplica al análisis o a la separación de mezclas de partículas, células, orgánulos o moléculas.
Teoría de la centrifugación y aspectos cuantitativos: véase Luque, p.123 o Freifelder, p.298.
* La centrifugación es un método por el cual se pueden separar sólidos de líquidos dediferente densidad mediante una fuerza centrífuga. La fuerza centrífuga es provista por una máquina llamada centrifugadora, la cual imprime a la mezcla un movimiento de rotación que origina una fuerza que produce la sedimentación de los sólidos o de las partículas de mayor densidad.

Los componentes más densos de la mezcla se desplazan fuera del eje de rotación de la centrífuga, mientras que loscomponentes menos densos de la mezcla se desplazan hacia el eje de rotación. De esta manera los químicos y biólogos pueden aumentar la fuerza de gravedad efectiva en un tubo de ensayo para producir una precipitación del sedimento en la base del tubo de ensayo de manera más rápida y completa.
Instrumental
1. Tubos
De vidrio o plástico. Resistentes químicamente (disolventes, reactivos) yfísicamente (tensión a las velocidades elevadas que se emplean). Diversos tamaños y formas. Plásticos especiales para altas velocidades.
2. Centrífugas
Se puede regular velocidad, tiempo, temperatura. Elevadas velocidades (102-105 rpm).
3. Rotores
Dos tipos: Rotor angular o de ángulo fijo y Rotor basculante




Modalidades
Según la velocidad:
 
Criterio aproximado:
Centrifugación a bajavelocidad
menos de 10.000 rpm
Centrifugación a alta velocidad
entre 10.000 y 20.000 rpm
Ultra centrifugación
más de 20.000 rpm

Según el propósito:
1. Centrifugación analítica
Objetivo: medir las propiedades físicas de las partículas que sedimentan, tales como su coeficiente de sedimentación o su masa molecular. Especialmente en la variante ultracentrifugación analítica.
Las moléculas seobservan mediante un sistema óptico durante la centrifugación. Los tubos de centrífuga deben ser de cuarzo para dejar pasar la luz visible y ultravioleta. Rotor basculante, observación en vertical.
2. Centrifugación preparativa
De uso más común. Objetivo: aislar partículas, células o moléculas para su análisis o utilización posterior. En general, se emplea mayor cantidad de muestra que en laanalítica.
Según el medio en el que se centrifuga y la forma como se aplica la muestra:
1. Centrifugación diferencial
(También llamada de frontera móvil). El tubo se llena con muestra y se centrifuga. El comportamiento de cada componente de la muestra depende de su forma, tamaño, densidad y, lógicamente, de las condiciones de centrifugación. Se obtienen sólo 2 fracciones: sedimento y sobrenadante.[Nota: la palabra precipitado es más adecuada para algo insoluble, que precipita por centrifugación o por otros mecanismos (por ej., una reacción química); sedimento es más correcto para lo que se ha forzado a ir al fondo pero seguiría siendo soluble; pellet es una palabra inglesa para lo que queda compactado en el fondo como consecuencia de la centrifugación]
Una aplicación típica esel fraccionamiento subcelular (separación de los distintos componentes de una célula, principalmente de los orgánulos) (véase Luque o Alberts) empleando sucesivas centrifugaciones a velocidad creciente.
2. Centrifugación zonal o de velocidad de sedimentación
La muestra se aplica en una capa delgada sobre el medio de centrifugación, que es un gradiente de densidad. Bajo la fuerza centrífuga, las partículassedimentan a través del gradiente concentrándose en zonas o bandas discretas. Su velocidad de avance (y, por tanto, el mecanismo de la separación) depende de su tamaño, forma y densidad; todos estos parámetros se combinan en el coeficiente de sedimentación,
Coeficiente de sedimentación=s=velocidad de sedimentaciónaceleración centrífuga
que se mide en unidades svedberg (1 S = 10−13 segundos).
La...