SIMPOSIO MOLECULAR


SIMPOSIO MOLECULAR
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Introducción
Automatizado Sanger sequencing
Este proceso implica una mezcla de técnicas: reproducción bacterial o PCR; purificación de plantilla; etiquetaje defragmentos de ADN que usan el método de terminación de cadena con transferencia de energía, etiquetada por tinte dideoxynucleotides y una polimerasis de ADN; electrofóresis capilar; y la detección defluorescencia que proporciona argumentos de cuatro colores de revelar la secuencia de ADN.
El resultado es una secuencia complementaria a la plantilla, comenzando con el primer, marcada de distintamanera en cada nucleótido, y de la longitud que queramos según el número de reacciones que 3hagamos.

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OBJETIVOS
Describir el fundamento de la reacción de secuenciación basada en elmétodo de Sanger.
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Secuenciación
Es el proceso mediante el cual se determina el orden de nucleótidos de un fragmento dado de ADN.
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Secuenciación tipo Sanger
QUE ES? Elmétodo se basa en la interrupción de la síntesis de DNA por el uso de dideoxinucleotidos además de los desoxinucleótidos normales.
Especificidad de la DNA polimerasa
Consiste en:
PCR: DNA molde, DNApol, dNTPs, primers, ddNTPs

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Para la secuenciación necesitamos:
Una plantilla a copiar.
Un primer para empezar la copia.
DNA polimerasa para hacer la copia.
ddNTPs. (ddATP, ddCTP,ddGTP, ddTTP).

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El método aprovecha la forma normal de la replicación del DNA
Para extender la cadena de DNA, usando la DNA polimerasa, deberá estar presente un grupo hidroxilo en elcarbono 3’ de la deoxiribosa.
Los fragmentos se generan al agregar pequeñas cantidades de 2’ 3’ dideoxinucleótidos a la reacción lo que interrumpe la polimerización cada vez que son incorporados en lacadena de DNA.
La polimerasa usada deberá de carecer de la actividad de la exonucleasa de corrección 3’ > 5’ para que funcione el método

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Terminación de cadena Sanger
Se denomina así...