técnicas isotópicas y radioactivas en moléculas



APLICACIÓNES DE LAS TÉCNICAS ISOTÓPICAS Y RADIACTIVAS PARA BIOMOLÉCULAS

Las técnicas isotópicas y radiactivas tienen muchas y distintas aplicaciones en diferentes campos bioquímicos, biológicos médicos o industriales.
1. APLICACIÓNES “IN VIVO”:
Oncología
Trazadores in vivo
Endocrinología y Hematología

2. APLICACIONES INDUSTRIALES
Diseño aeronaútico (para evitar fugas)Estudio y control de las construccióne de cemento armado, yvenranajes (arquitectura, monumentos, construcción presas, fabricas)
Restauración muebles y pinturas

3. APLICACIONES EN BIOLOGÍA Y BIOQUÍMICA
Datación de materiales biológicos
Trazadores en el análisis de conductas de animales (en cotos)
Estudio de volúenes de fluidos fisiológicos
Cuantifiación de compuestos biológicos: método de ladilución isotópica y radioinmunoensayo (RIA)
Dilucidación de rutas metabólicas y mecanismos de reacci´n enzimática.
DETECCION Y CUANTIFICACION DE MOLECULAS EN FENTOMOLES
4. APLIACIONES EN BIOLOGÍA MOLECULAR (técnicas electroforesis)
Técmica de la huella “footprinting”
Secuenciación de Ac nucleicos
Hibridación in situ utilizando sondas radiactivas.


ÉCNICA DE FOOTPRITING Se utiliza lapalabra inglesa "Footprinting" (obtención huella plantar) para designar una técnica de biología molecular para determinar la secuencia exacta de un DNA a la que se unen algunas proteínas.
La técnica es la siguiente (*)
1.Se clona el fragmento de DNA que contiene el sitio en el que se une la proteína (p.ej, el represor lac)
2.Se marca uno de los extremos de las moléculas de DNA con unamolécula radioactiva (p. ej, APT radioactivo)
3 Se digiere el DNA con una DNA-asa I (esta enzima corta las moléculas del DNA de forma aleatoria, a diferencia de las enzimas de restricción que lo cortan en secuencias determinadas). El resultado es una mezcla de fragmentos radioactivos de longitud variable, en la que el fragmento más pequeño representa un sólo nucléotido
4Se separan losfragmentos radioactivos por electroforesis y se revela el autoradiograma. Cuando el represor lac se une a su ligando (una secuencia de 24 pares de bases) la DNA-asa I no puede atacar la secuenca, por lo que los fragmentos cubiertos por el represor no apareceran en el autoradiograma. La ausencia de estos representa el "footprinting"
5 La misma muestra de DNA sin proteger por el represor se somete a unproceso normal de secuenciación, comparándose con el autoradiograma anterior. La secuencia exacta de bases en el operador lac puede ser leída directamente ya que está representada por los fragmentos escalonados de DNA que están ausentes en el footprint

SECUENCIACIÓN DE ACIDOS NUCLEICOS
La secuenciación de ADN es un conjunto de métodos y técnicas bioquímicas cuya finalidad es la determinacióndel orden de los nucleótidos adenina, guanina, citosina y timina (A, C, G y T) en un oligonucleótido de ADN. La secuencia de ADN constituye la información genética heredable del núcleo celular, los plásmidos, la mitocondria y cloroplastos (en plantas) que forman la base de los programas de desarrollo de los seres vivos. Así pues, determinar la secuencia de ADN es útil en el estudio de lainvestigación básica de los procesos biológicos fundamentales, así como en campos aplicados, como la investigación forense.

El desarrollo de la secuenciación del ADN ha acelerado significativamente la investigación y los descubrimientos en biología. Las técnicas actuales permiten realizar esta secuenciación a gran velocidad, lo cual ha sido de gran importancia para proyectos de secuenciación a gran escalacomo el Proyecto Genoma Humano. la secuencia completa de ADN de muchos genomas de animales, plantas y microorganismos. 



Método enzimático de terminación de cadena o método didesoxi de Sanger

Para llevar esta técnica a cabo se necesita:
El ADN molde o segmento de ADN que se desea secuenciar. se necesita tener gran cantidad de ese fragmento, y por tanto, hay que clonarlo en un...