Tec. serologicas

SANGRE

a) Diagnóstico presuntivo
I. Prueba de la bencidina, de la fenolftaleína, de la leucomalaquita verde, del luminol, etcétera.

b) Diagnóstico genérico
II. Investigación de los elementos formes: eritrocitos, leucocitos.
III. Formación de microcristales con derivados de la hemoglobina: Teichman, Takayama, Wagenaar.
IV. Identificación del espectro de absorción de lahemoglobina y derivados (espectrofotometría).
V. Identificación de hemoglobina (electroforesis). Separación e identificación de proteínas séricas (inmunoelectroforesis).
VI. Identificación de hemoglobina y sus derivados (cromatografía en papel, en columna o en capa fina).
VII. Identificación de hemoglobina, mediante anti-hemoglobina.

c) Diagnóstico específico
I. Precipitinas (ringtest).
II. Inmunodifusión e inmunoelectroforesis.
III. Prueba de látex.

d) Diagnóstico individual
I. Investigación de aglutinógenos del sistema ABO. En sangre seca: látex, absorción-elución, absorción-inhibición.
II. Investigación sistemas Mn, Rh. En sangre seca: absorciónelución.
III. Investigación de grupos plasmáticos.
IV. Investigación de grupos enzimáticoseritrocitarios.
V. Investigación de grupos leucocitarios.
VI. Análisis de ADN (Southern Blotting, PCR, ADN mitocondrial).


TÉCNICA DEL LUMINOL.
El luminol es el 3 amino-ftalhidracina y el reactivo se prepara de la siguiente manera, en el momento de utilizarse:
Solución A.
Luminol 0.1 gr
Carbonato de sodio 1 gr
Agua destilada c.b.p. 100 ml
Solución B.
Hidracina hidratada al 95% 0.1 grAgua destilada 100 partes
Al ml de la solución A, se añade una gota de agua oxigenada e inmediatamente después, 2 gotas de la solución B; se espera un minuto y la mezcla se esparce sobre la zona sospechosa. En caso positivo, las manchas de sangre producen luminiscencia.
Como reactivo, no altera la mancha, se pude continuar con la metodología normal.

TECNICA DE ADHLER O DE BENCIDINA.FUNDAMENTO QUIMICO
Las peroxidasas sanguíneas son catalasas que, como su nombre lo indica, poseen actividad catalítica (enzimática) en las reacciones de oxidación, ya que tienen la propiedad de descomponer el peróxido de hidrogeno u otros peróxidos orgánicos, produciendo liberación de radicales oxhidrilo según la siguiente reacción:
H2O2 H OH + O
En el grupo hem de la hemoglobinaposee esa actividad enzimática, que puede catalizar la ruptura del peróxido de hidrogeno. Mientras no estén presentes otras sustancias orgánicas oxidantes, esta actividad de la hemoglobina, descompone el peróxido de hidrogeno en agua y oxigeno, que al reaccionar con la bencidina la oxidaran formando un compuesto intensamente azul.

La oxidación de la bencidina es utilizada como prueba presuntivapara la identificación de sangre. La técnica tiene una sensibilidad de 1, 300, 000 a 500,000.
Las tinciones hematológicas son un conjunto de procesos que conducen a la coloración de las estructuras que componen las células sanguíneas. Esto tiene por objeto el aumentar el contraste entre esas estructuras y el medio que las rodea, y permite por tanto que las células sean visualizadasmicroscópicamente con mayor facilidad.
MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS
* Reactivo de Adhler
* Acido acético glacial
* Agua oxigenada
* Solución salina
* Aplicadores de madera
* Vidrios de reloj
* Manzana
* Papa
* Hígado de pollo
* Sangre
* Azul de metileno
* Frotis sanguíneo
* Microscopio
* Agua
DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
Humedecer un hisopo con aguadestilada y frotar sobre la mancha problema (o recortar un pedazo 0.5 x 0.5cm de tela maculada con la mancha problema). Añadir 1 o 2 gotas del reactivo, observar que no de coloracion y agregar 2 gotas de agua oxigenada.
Reacción positiva: Se obtendrá una coloración azul.
Se prepara el frotis sanguíneo en un porta objetos, se deja secar a temperatura ambiente.
Una vez seco se le agrega el azul...