tecmed

FOSFATASA ALCALINA – LS (IFCC)
Reactivo líquido para la determinación de la enzima
Fosfatas Alcalina en suero o plasma a 37ºC. según IFCC.

Para uso en el diagnóstico in Vitro. Apto para usar en autoanalizador.
SIGNIFICANCIA CLINICA

TECNICA

La enzima fosfatasa alcalina se encuentra concentrada en el hígado,
hueso, placenta, intestino, y algunos tumores. En los niños y durante elembarazo se encuentra en concentraciones más altas debido a los
procesos de crecimiento óseo y por acción placentaria,
respectivamente. Esta enzima se encuentra elevada en enfermedades
tales como la hepatitis, enfermedades óseas, entre otras.

Llevar el reactivo a la temperatura de reacción (37°C.) y poner el
espectrofotómetro en cero contra blanco de agua destilada.

FUNDAMENTOS DEL METODOTest cinético y fotómetrico de acuerdo a IFCC (International Federation
of Clinical Chemestry and Laboratory Medicine),
La fosfatasa alcalina cataliza la hidrólisis del p-Nitrofenilfosfato a pNitrofenol y fosfato, produciéndose un aumento de absorbancia a 405
nm. proporcional a la concentración de enzima en la muestra.
p-Nitrofenilfosfato

PAL

p-Nitrofenol + fosfato

Reactivo de trabajo(ml)

1.00

Volumen de muestra

(ml)

0.02

Mezclar y transferir a la cubeta del espectrofotómetro. Incubar 60
segundos a la temperatura de reacción. Leer la absorbancia inicial (A1)
a 405 nm. Repetir la lectura a los 60 segundos, exactos
Adaptaciones para la aplicación de este reactivo en autoanalizadores
están disponibles a solicitud. Es responsabilidad del laboratorio validaresta aplicación.
CALIBRACION
•

REACTIVOS

•

Conservados entre 2° y 8°C. y protegidos de la luz, estables hasta la
fecha de caducidad indicada en la etiqueta.
Reactivo 1:
Buffer 2-amino-2-metil-1-propanol pH 10,4
Mg2+
Sulfato de Zinc
HEDTA
Estabilizantes no reactivos

0,58 M
2mM
1mM
2mM
c.s.

Reactivo 2:

En la calibración se recomienda utilizar calibrador sérico VALTROLC(código 210-130), proceder de igual forma que con las muestras.
Se recomienda recalibrar en cualquier momento que se evidencie
alguno de estos acontecimientos:
• El lote de reactivo cambia
• Se realiza un mantenimiento preventivo del equipo
• Los valores de control han cambiado o se encuentran fuera
de escala.

CALCULOS
Factor = Concentración Calibrador
∆A/min. Calibrador
Actividad PAL(UI/L)= Factor x Abs. Muestra
O bien se puede utilizar el siguiente factor:

p-Nitrofenilfosfato
Estabilizantes no reactivos

66 mM
c.s.

Preparación del Reactivo de Trabajo:
Mezclar 10 ml. de Reactivo 1 con 2 ml. de Reactivo 2 o preparar el
volumen requerido manteniendo la proporción. Protéjase este reactivo
de la luz directa. Estabilidad del reactivo de trabajo: 10 días entre 2° y8°C. Descartar el reactivo si su absorbancia es mayor de 0.8 a 405 nm.
contra blanco de agua.
MUESTRA

Actividad PAL (UI/L) = ∆A/min x 2751
Factor =

Vt

x

1000

= 2751

∑ PNP x P x Vm

Vt= Volumen total de reacción
∑ PNP = Coef. de extinción milimolar del p-NPP a 405 nm.
P= Espesor del paso de luz en la cubeta
Vm= Volumen de muestra utilizado
CONTROL DE CALIDAD

Depreferencia utilizar suero libre de hemólisis o plasma heparinizado.
No utilizar plasma obtenido con oxalato, fluoruro o citrato ya que
interfieren con el ensayo. La fosfatasa alcalina es estable a lo menos 4
días entre 2° y 8°C. y sobre un mes a -20°C.
MATERIAL NECESARIO NO INCLUIDO
Espectrofotómetro manual o automático o fotocolorímetro de filtros
con cubeta termoestable, capaz de medirabsorbancia a 405 nm, baño
termoregulado, cronómetro, pipetas, calibrador y sueros controles.

•

•

•

Es conveniente analizar junto con las muestras sueros controles
valorados para Fosfatasa Alcalina por este método. Se recomienda
la utilización de los sueros controles VALTROL-N (código 210-100)
y VALTROL-P (código 210-110).
Si los valores obtenidos para los controles se encuentran fuera...