TECNICAS DE METODOLOGIA DE INVESTIGACION

 TECNICAS DE METODOLOGIA DE INVESTIGACION
ELISA
Es una técnica de laboratorio que identifica pequeñas partículas –antígenos–, y gérmenes que causan enfermedades.
Son las siglas por las que se conoce al ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas .Se trata de una técnica de laboratorio que fue diseñada por científicos suecos y holandeses en 1971, que permite detectar pequeñas partículas llamadasantígenos, que habitualmente son fragmentos de proteínas. La identificación es específica, es decir, consigue que pequeños segmentos de proteínas destaquen y no puedan ser confundidas con otras.
Para poder identificar los antígenos se utilizan moléculas con dos componentes acoplados: un anticuerpo (que se une al antígeno de forma específica) y una enzima (que se activa y señala la unión alantígeno).
En el hospital se utiliza principalmente para identificar gérmenes agresores que se encuentran en la sangre, orina, esputos, etcétera. La técnica pronto se generalizó con el empleo de equipos simples y muy baratos que se utilizan todavía hoy en muchos centros diagnósticos de todo el mundo.
Los diferentes tipos de ELISA son:
ELISA directo: es la forma más básica de realizar la técnica.Consiste en recoger una muestra a estudiar y ponerla en un pocillo (un recipiente pequeño) en frente de una muestra igual pero contaminada con el germen a estudiar, y otra muestra en la que se sabe que no hay germen. Se aplica el anticuerpo con la enzima en los tres pozos y se compara la muestra a estudio con las otras dos.
ELISA indirecto: se realiza de forma similar al ELISA directo, pero en este casose añade primero un anticuerpo sin enzima y después uno con enzima.
ELISA sándwich: en este caso en los pocillos primero se añade un anticuerpo y después la muestra, para que los antígenos queden ya retenidos en el fondo del pozo. Después se añade el anticuerpo con la enzima. Es la forma más eficaz de realizar la prueba.
ELISPOT: se trata de un tipo de ELISA que permite conocer de formacuantitativa el antígeno, incluso identifica el número concreto de células donde se encuentra.
¿Cuándo se hace un ELISA?
Situaciones en las que se quieran detectar antígenos cuya existencia pueda ser determinante para un diagnóstico o para establecer conclusiones en un estudio científico. Algunas de las situaciones más frecuentes donde se usa el ELISA son:
Diagnóstico de VIH
Diagnóstico de hepatitis B:Detección de gérmenes en heces
Detección de antígenos en orina
Los anticuerpos se añaden a las muestras de sangre para detectar los antígenos.
Cómo se hace un ELISA
El análisis por ELISA lo pedirá el médico cuando sea necesario y sea la mejor arma diagnóstica para estudiar tu enfermedad. Para hacerla, te tomarán primero la muestra sobre la que se realizará el ELISA.
1. Se deposita la muestrarecogida en bandejas con pequeños pozos. Al lado habrá pozos para muestras que se sepan que están contaminadas y libres de antígenos conocidos.
2. Una vez depositada la muestra se añaden los anticuerpos que detectan los antígenos si los hay. En el otro extremo de los anticuerpos hay enzimas acopladas.
3. Si es un ELISA indirecto se pueden añadir otros anticuerpos que detecten los anticuerpos previos; asíse amplía la señal.
4. Se realiza un lavado de los pocillos; así se eliminan los anticuerpos que no estén unidos a antígenos.
5. Se añade un sustrato, es decir, una sustancia química que reacciona con las enzimas de los anticuerpos que queden. Al reaccionar se forman metabolitos.
6. Por último, se mide la cantidad de metabolito que hay mediante diferentes técnicas, como la espectrofotometría.Resultados del ELISA
Los resultados del ELISA pueden tardar varios días desde que se toma la muestra para estudiarla.

El ELISA se expresa en valores cualitativos, es decir, o es positivo o es negativo.
Western blot
Inmunoblot o electrotransferencia, es una técnica analítica usada para detectar proteínas específicas en una muestra determinada (una mezcla compleja de proteínas, como un extracto...