Temas Variados

INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL
ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLOGÍCAS

PRACTICA N.1
DETERMINACION DE AMINOACIDOS TERMINALES
CON GRUPO ALFA AMINO LIBRE “METODO DE SANGER”
Espinoza VillalbaMónica Mirely Serna Galarza Adriana
Sección: 3 Gpo:4QM1

INTRODUCCION:
La mayoría de las proteínas tienen dos extremos: un amino (N-terminal) y uncarboxilo. Al identificar los residuo de aminoácidos de cada extremo, se pueden identificar dos asideros de la proteína; los residuos del amino terminal se identifica mediante uno de los métodoshabituales

OBJETIVOS:
Determinación de los aminoácidos que contienen el grupo alfa-amino terminal de las cadenas de la molécula hemoglobina por medio de método de Sanger.
INTERPRETACION:
* Aladicionar NaHCO3 desprotona el grupo imido, no agregamos NaOHporque esta es una base fuerte y puede haber una reacción acido-base con el aminoácido.
* El ultimo aminoácido es el que reacciona con elreactivo de Sanger pues es el aminoácido terminal no tiene enlace peptídico
* Al adicionar HCl se hidroliza y se rompe el enlace peptídico y entra H2O pero el enlace entre el grupo 2,4dinitrofenilo y el α-amino del aminoácido terminal es relativamente estable ante la hidrolisis acida.
* El grupo amino N-terminal
* Después de hidrolizar con HCl 6M la proteína seleccionada, elaminoácidoN-terminal se separa e identifica como su derivado 2,4 dinitrofenilo; elresto de los aminoácidos de la mezcla de hidrólisis permanece sinmodificación química.
* Se utilizo éter para extraer losdinitrofenil derivados para identificar
* Al inicio se utilizo éter con FeSO4 para extraer la proteínadinitrofenilada, se utilizo con FeSO4 para proteger.
* Se extraen con éter hidrolizadolos DNP-aminoácidos terminales que son no polares y quedan en la fase etérea, mientras que los aminoácidos que no reaccionaron con el DNFB y los DNP derivados no terminales, son polares con carga...