Tincion Gram

PRACTICA N° 02
TINCION GRAM
INTRODUCCIÓN Y FUNDAMENTO

La tinción de Gram es uno de los métodos de tinción más importantes en el laboratorio bacteriológico y con el que el estudiante debe estar perfectamente familiarizado. Su utilidad práctica es indiscutible y en el trabajo microscópico de rutina del Laboratorio de Microbiología las referencias a la morfología celular bacteriana (cocos,bacilos, positivos, negativos, etc.) se basan justamente en la tinción de GRAM. Esta tinción se denominada así por el bacteriólogo danés Christian Gram, quien la desarrolló en 1844. Sobre la base de su reacción a la tinción de Gram, las bacterias pueden dividirse en dos grupos, Gram positivas y Gram negativas (en este caso, los términos positivo y negativo no tiene nada que ver con carga eléctrico,sino simplemente designan dos grupos morfológicos distintos de bacterias).Las bacterias Gram-positivas y Gram-negativas tiñen de forma distinta debido a las diferencias constitutivas en la estructura de sus paredes celulares. La pared de la célula bacteriana sirve para dar su tamaño y forma al organismo así como para prevenir la lisis osmótica. El material de la pared celular bacteriana que confiererigidez es el péptido glicano. La pared de la célula Gram-positiva es gruesa y consiste en varias capas interconectadas depeptidoglicano así como algo de ácido teicoico. Generalmente, 80%-90% de la pared de la célula Gram-positiva es peptidoglicano. La pared de la célula Gram-negativa, por otro lado,contiene una capa mucho más delgada, únicamente de peptidoglicano y está rodeada por una membranaexterior compuesta de fosfolípidos, lipopolisacáridos, y lipoproteínas. Sólo10% - 20% de la pared de la célula Gram-negativa es peptidoglicano. Debido a su importancia en taxonomía bacteriana y a que indica diferencias fundamentales de la pared celular de las distintas bacterias, describiremos aquí con algún detalle la tinción de Gram y las interpretaciones que actualmente se hacen sobre el porquéde su funcionamiento. Las células Gram positivas, a causa de sus paredes celulares más espesas (tienen más peptidoglicano y menos lípido), no son permeables al disolvente ya que éste deshidrata la pared celular y cierra los poros, disminuyendo así el espacio entre las moléculas y provocando que el de complejo cristal violeta-yodo quede atrapado dentro de la pared celular. Para poner de manifiestolas células Gram negativas se utiliza una coloración de contraste. Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina básica. Después de la coloración de contraste las células Gram negativas son rojas, mientras que las Gram positivas permanecen azules.Deben destacarse algunos aspectos cruciales de la tinción de Gram:1) El tratamiento con cristal violeta debe preceder altratamiento con yodo. El yodo por sí solo tiene poca afinidad con las células.2) La decoloración debe realizarse con poca agua para evitar que pierdan la tinción las células Gram positivas. EI proceso de decoloración debe ser corto y es esencial un cálculo preciso del tiempo para obtener resultados satisfactorios.3) Cultivos más viejo de 24 horas pueden perder su habilidad de retener el complejocristal violeta - yodo.

OBJETIVOS:
Mostrar la importancia de una tinción para la diferenciación de bacterias basándose en las propiedades estructurales de la pared celular, aplicando el mecanismo de la coloración de Gram, con microorganismos conocidos y desconocidos

• Emplear técnicas bacteriológicas simples
• Conocer el fundamento estructural de la tinción de gran
• Utilizar colorantesy comprender su utilización
• Utilizar el microscopio con el objetivo de inmersión
• Observar células procariotas

En el estudio de la ciencia que nos ocupa, la microbiología, es fundamental la observación de los microorganismos. Esta observación se hace necesaria para su clasificación e identificación.
Para ello se usa el microscopio tanto óptico como electrónico, y en sus diversas...