Tinción Gram

Práctica: Identificación microscópica bacteriana mediante Tinción Gram
Introducción:
Los primeros cazadores de microbios idearon técnicas de identificación microbiana para facilitar suobservación, conocer aspectos estructurales como su forma e inclusive para su clasificación. Uno de estos grandes personajes que dejaron huella en la microbiología fue Hans Christiam Gram quien en 1884desarrolla la técnica de tinción que lleva su nombre, es una técnica muy utilizada en los laboratorios y permite distinguir a dos grandes grupos de bacterias las Gram positivas que poseen una pared gruesa depeptidoglucano y las Gram negativas que poseen una pared más delgada además de poseer dos membranas celulares una interna y otra externa.
Esta tinción también se correlaciona con otras propiedadescomo endotoxinas, susceptibilidad a antibióticos, sensibilidad o resistencia a sales biliares, punto isoeléctrico y tensión superficial.
En términos generales la técnica consiste de estos pasos(Imagen-1):
I. Tinción inicial. Las células se tiñen con cristal violeta, el cual es el colorante primario. En este paso todas las células se tiñen de morado.
II. Mordiente. Se adiciona yoduro (lugol)que reacciona con el cristal violeta y forma un complejo cristal violeta-yoduro. En este paso todas las células continúan de color morado.
III. Decoloración. Se adicionas un solvente no polar, elcual actúa lavando el complejo violeta-yoduro de las células Gram negativas. De esta manera las bacterias Gram positivas continúan moradas y las Gram negativas quedan incoloras. Este es el paso criticode esta tinción pues si se exagera, decolora las Gram positivas y si se hace muy débil no decolora a las Gram negativas.
IV. Contratinción se vuelve a teñir con safranina o fucsina de manera que lasbacterias Gram negativas que habían sido decoloradas, se tiñen de rosado a fucsia según el colorante empleado. en esta paso las bacterias Gram positivas no se ven alteradas y permanecen moradas....