TSuperior Esp.Laboratorio

Documentos de la Red Nacional de Biobancos

Guía de protocolos utilizados para la
obtención de ácidos nucléicos en biobancos

Septiembre 2012

Este documento ha sido elaborado con la participación de las siguientes personas e
instituciones:
Coordinador:
Alberto Orfao de Matos -Banco Nacional de ADN
Adjunto coordinador:
Rosa Pinto Labajo –Banco Nacional de ADN
Colaboraciones:
JuanPascual Sánchez.-Hospital Marqués de Valdecilla
Eugeni Aragall –Fundación Instituto de Investigación Germans Trías i Pujol
Edurne Pedrosa Berrio -Fundación Instituto de Investigación Germans Trías i Pujol
Antía Solloso Banobre –Complejo Hospitalario de la Coruña
Manuel Posada de la Paz –Instituto de Enfermedades Raras-ISCiii
Elisabet Ars Criach –Fundación Puigvert
Irene Vieítez González–Complejo Hospitalario Universitario de Vigo
Jacobo Martínez Santamaría –Centro Superior de Investigación en Salud Pública
Elena Bellmunt –Hospital Universitario y Politécnico La Fe
Pablo Isidro Marrón –Hospital Universitario Central de Asturias
Raquel Coya Guerrero –Biobanco Vasco/H. Cruces
Rocío Aguilar Quesada –Banco ADN Humano de Andalucía
Rosario Martinez Marín –Hospital Virgen de la ArrixacaTeresa Escámez –Hospital Virgen de la Arrixaca

OBJETO

El objetivo de esta guía de trabajo consiste en la elaboración de un documento donde se
recogen diferentes protocolos de trabajo (PNTs) utilizados en varios biobancos integrados en
la Red Nacional del ISCIII para la obtención de ácidos nucleicos a partir de diferentes tipos de
muestra.
Los protocolos han sido clasificados según suprincipio de actuación y en cada uno de ellos
se especifica para qué tipo de muestras estarían indicados, así como el rendimiento
aproximado y la calidad de las muestras que deberían obtenerse
Dado que cada biobanco ha desarrollado sus protocolos en función del tipo de muestras
que procesa y del equipamiento disponible, no se pretende unificar todos los procedimientos
en un solo protocolo,sino más bien dar a conocer sus características, su posible idoneidad
para los distintos tipos de muestra y la posible aplicación a los diferentes biobancos en
función del equipamiento del que dispongan y su grado de exigencia en cuanto a la calidad y
cantidad (máximo rendimiento, pureza y funcionalidad) de los productos a obtener.

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1. INTRODUCCIÓN
El procedimiento general de extracciónde ácidos nucleicos consiste en tres etapas
consecutivas: disgregación de las células o tejidos (lisis celular), inactivación de las nucleasas
intracelulares y en separación de los ácidos nucleicos de los demás componentes celulares.
La lisis celular depende en gran medida del tipo de muestra que se va a procesar.
Mientras que en muestras como sangre, células, ciertos tipos de tejidos o salivapuede
alcanzarse una eficiente lisis celular en tiempos relativamente cortos, en otros tipos de
muestras como tejidos incluidos en parafina la lisis celular requiere un tratamiento previo
mucho más laborioso.

1.1. Lisis celular.
Durante la lisis celular se procede a la destrucción de las estructuras formadas por lípidos
y proteínas permitiendo la liberación de los ácidos nucleicos delnúcleo celular. La lisis se
lleva a cabo mediante una solución salina que suele contener detergentes que desnaturalizan
las proteínas y/o proteasas. Una vez separados los ácidos nucleicos de las proteínas y lípidos
se lleva a cabo su purificación.

1.2. Purificación de ácidos nucleicos.
Los métodos de purificación presentan una gran variabilidad y están desarrollados en
función de laspropiedades físico-químicas de las moléculas de ADN y ARN. Algunos de estos
métodos de extracción y purificación utilizados en los biobancos integrados en la Red
Nacional de Biobancos del ISCIII y descritos con mayor detalle a lo largo de esta guía de
trabajo, se resumen a continuación:
1.2.1. Precipitación mediante sales y alcoholes:
Tras la lisis celular y la eliminación de las proteínas de la...