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Extracción de ADN en Plantas

Método “Mini-Prep”

Alejandra Vázquez Lobo. 1996. “Filogenia de Hongos Endofitos del Genero Pinus L.:Implementación de Técnicas moleculares y Resultados Preliminares”. Tesis de Licenciatura. Facultad de Ciencias, UNAM.

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|Moler 1gr de tejido con nitrógeno líquido|
|Moler aproximadamente 0.2 gr de tejido molido con 1,000μl CTAB2X y recuperar todo en un tubo eppendorf de 1.5ml |
|Centrifugar 10,000g 8min 4ºC --->eliminar sobrenadante |
|Resuspender con 600μl CTAB 2X (agregar 60 ul Proteinasa KRecuperar 200μl -250μl de sobrenadante en un tubo nuevo |
|Agregar 2/3 de vol. (aproximadamente 600μl) de Isopropanol frío (–20ºC)|
|Reposar 2hrs. a –20ºC (el tiempo puede variar según la cantidad de impuresas y la naturaleza de la muestra de 30 min. A 2 hrs)|
|Centrifugar 9,000g 5min 4ºC--->Eliminar sobrenadante |
|Agregar 1000μl etanol 70% frío –20ºC ---> Reposar 5min temp. ambiente|
|Centrifugar 7,000g 5min ---> Eliminar sobrenadante|
|Dejar secar hasta que la muestre quede seca. |

Nota: La tesis de Alejandra...