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Introducción
Los procesos vitales intrínsecos de los organismos vivos están mediados por una amplia gama de factores orgánicos, dentro de los cuales las enzimas cumplen una función importante al momento de regular la velocidad de las reacciones que el organismo necesita para su correcto desempeño y para el mantenimiento de la Homeostasis, pero su funcionalidad depende de una serie de factorestanto térmicos así como químicos, por no mencionar un nivel pH adecuado para que la estructura proteica de la enzima pueda cumplir su propósito. Considerando su naturaleza proteica, con ligeros cambios en la acidez, temperatura, o al verse sometida a la acción de ciertos químicos tales como los detergentes, puede desplegarse su estructura tridimensional y de este modo provocar la desnaturalizaciónde la enzima y por consecuencia, la anulación de su rol biológico.
Analizar la acción de la enzima amilasa salival
Procedimiento Experimental
En la primera actividad, se realiza una extracción de la enzima α-amilasa salival de la boca, para ello utilizamos un enjuague bucal (NaCl 0,9 % p/v) para un individuo normal, éste debe mantener 50 ml del enjuague en su boca por mas de 30 segundos,posterior, se debe verter contenido del enjuague sobre un embudo que posee una mota de algodón para la filtración de alimentos y residuos, almacenándose la enzima en un matraz. Ya finalizada la extracción de la enzima, procedemos a completar 5 tubos de ensayos con las siguientes soluciones, tubo 1: buffer correspondiente pH 5 (2ml) – almidón 1 % p/v (2ml) – enzima α-amilasa (2ml), tubo 2: buffercorrespondiente pH 7 (2ml) - almidón 1 % p/v (2ml) - enzima α-amilasa (2ml), tubo 3: buffer correspondiente pH 7 (2ml) - almidón 1 % p/v (2ml) - NaCl 0,9 % p/v (2ml), tubo 4: buffer correspondiente pH 9 (2ml) – almidón 1 % p/v (2ml) – enzima α-amilasa (2ml), tubo 5: buffer correspondiente pH 9 (2ml) - almidón 1 % p/v (2ml) - NaCl 0,9 % p/v (2ml), todos estos tubos se mezclan suavemente en formacircular, sin agitar fuertemente. Luego, se procede a incubar todos los tubos de ensayos bajo el agua a 37ºC por 15 minutos, este experimento tiene como objetivo analizar el efecto que produce el pH en distinta soluciones. Ya transcurrido el tiempo, se verte sobre cada tubo de ensayo 9 gotas de Lugol, el cual se mezcla con la solución y se anotan los análisis posteriores.
La segunda actividad, elobjetivo principal es el análisis de denaturacion de la enzima α-amilasa, a través de agentes desnaturalizantes, para ello se completan 5 tubos con las siguientes soluciones: ver anexo Nº1, importante, cabe mencionar que el almidón no se verte sobre los tubos, sin antes la pre-incubación. Luego, ya obtenidas las soluciones, estas se pre-incuban durante 10 minutos, después de transcurrido los 10 min. seretiran los tubos del agua y se verte sobre ellos los 2 ml de almidón antes mencionados, se incuba nuevamente pero esta ves durante 15 minutos, se observa y se analiza cambios. Ya finalizada esta etapa, se procede a retirar los tubos del agua caliente, y se verte sobre ello 9 gotas de Lugol, mezclando y agitando suavemente, observándose cambios en las soluciones.



Resultados
Referido a laprimera actividad realizada, se observa una alta actividad enzimática en los tubos 1 y 2, ya que en estos se encuentra la presencia de la enzima α-amilasa salival, la cual tiene reacción con el almidón, rompiendo los enlaces glucosídicos, permitiendo la no reacción del Lugol con el almidón, ósea, no tiñéndose del color característico. Con los tubos restantes, el N° 3 si hubo reacción completa delLugol, ya que en este tubo, no se preparo con la enzima, dejando solo en almidón con NaCl, los tubos 4 y 5 por su parte, presentaron actividad del Lugol moderada en comparación con los tubos 1 y 2, esto se debe al cambio de pH de las soluciones, provocando una reacción de menor eficiencia de la enzima salival.
Por otra parte, la act. 2 analizamos la acción de los agentes desnaturalizantes como...