E.Biol.











Equipo 2


Blas Garfias Carlos
Chávez Miguel Rosa Isela
Isidra Arellano Mariel Carolina
Jiménez Martínez Alan Eduardo
Negrete Correa Christian Daniel
Rodriguez Bautista Xochitl Araceli











Aislamiento de cloroplastos y cuantificación de clorofila


Resumen

La practica consistio en aprender a usar la centrifuga clinica mediante el aislamientode cloroplastos en 30 gramos de hojas de Spinacia oleracea, se hicieron 3 centrifugaciones, en la primera (500 rpm durante 3 minutos) se recupero el sobrenadante y se observo en el microscopio, en la segunda (2500 rpm durante 12 minutos) se recupero la pastilla al igual que en la tercera(2500 rpm durante 12 minutos) la muestra final fue observada en el espectofotometro(spectronic 20) a doslongitudes de onda. Cuando la longitud de onda fue de 663 nanometros la transmitancia fue de 30.5 y la absorbancia de 0.5. Cuando la longitud de onda fue de 643 nanometros la transmitancia fue de 46 y la absorbancia de .31. Se concluye que el experimento pudo haber sido mejorado y hubieron problemas con el material, por ende la practica tuvo que ajustarse. Los objetivos fueron logrados, se logro ver en elmicroscopio los cloroplatos, se logro aprender el uso y la metodologia de la centrifuga clinica, y tambien se observo transmitancia y abosrbancia en el espectofotometro (spectronic 20) a dos longitudes de ondas distintas y por ende se logro aplicar la ley de Beer y comparar las concentraciones.



Introducción

El fundamento de la practica es que aprendamos la importancia y usos de lacentrifuga mediante aislamiento de cloroplastos y tambien que usaramos conceptos antes aprendidos como el uso del microscopio y espectofotometro.

Objetivo

1.- Evaluar la importancia de la centrifugacion diferencial como tecnica para separar componentes celulares.
2.-Determinar la concentracion de la clorofila “a” y “b” en una muestra de cloroplastos utilizando el espectofotometro y aplicandola ley de Beer.
3.-Comparar las proporciones de clorofila entre “a” y “b”

Método

Primero se puso a enfriar el mortero y el pistilo en la palangana con hielo, se calibro la balanza granataria de dos platos a 0, despues se taro con los vasos de precipitados. Posteriormente se procedio a lavar las espinacas, acto seguido se comenzo a cortar las hojas quitando venas grandes y tallos. Algunosmiembros del equipo procedieron a calibrar la balanza granataria de un plato a 0 y tarar un papel para pesar sobre el las hojas de espinaca, despues con la balanza granataria de un plato se pesaron 30 grs. de hojas de espinaca ya sin las venas gruesas ni los tallos, cuando se obtuvieron los 30 gramos deseados se procedio a macerar en el mortero los 30 gramos con 60 ml de solucion NaCl 0.35M y 10 mlde solucion amortiguadora, se macero durante 4 minutos acto seguido se preocedio a usar la gasa doblada en 4 partes para filtrar las hojas ya maceradas, se virtio en uno de los vasos de precipitados. Despues se procedio a llenar 6 tubos con un volumen de 10 ml aprox. y se igualo su peso en la balanza granataria de doble plato, una vez equilibrados se procedio a centrifugar a 500 rpm durante 3minutos y con la pipeta se recupero el sobrenadante y fue vaciado en el otro vaso de precipitados; posteriormente se procedio a tomar una muesta y fue observada en el microscopio. Acto seguido se lavaron los tubos y se procedio a vertir 5 ml aprox de sobrenadante en cada tubo, una vez hecho esto se equilibraron pesos en la balanza granataria de doble plato y se procedio a centrifugar, esta vez a 2500rpm durante 12 minutos, posteriormente se deshecho el sobrenadante y se suspendieron las pastillas en 2ml de NaCl 0.35M y se recuperaron usando el shacker. Se adicionaron 5 ml mas de NaCl 0.35M a cada tubo, se juntaron las pastillas en un vaso de precipitados previamente lavado y se adicionaron 5 ml mas de NaCl 0.35M. Se procedio a centrifugar una vez mas a 2500 rpm durante 12 minutos, una vez...