Cromato
Páginas: 5 (1177 palabras)
Publicado: 27 de noviembre de 2012
BIOL3349
Temario examen III-Parte II
A demás de los capítulos 7, 8, 9 los capítulos 10 y 11 brindan información importante sobre la expresión genética y técnicas importantes. El estudiante deberá enfocarse los conceptos que se incluyen en este documento con respecto a estos dos capítulos.
Capitulo 10. Debe leer la sección 10.2
• Electroforesis- técnica que se utiliza para separarmacromoléculas como las proteínas y los ácidos nucleicos. Para separar las macromoléculas las muestras se colocan en una matriz o gelatina y se aplica un campo eléctrico que facilita la separación. Pueden ver esta animación y la figura 10.4 del capitulo 10. http://learn.genetics.utah.edu/content/labs/gel/
o La electrophoresis de Agarosa- utiliza agarosa como matriz y se utiliza mayormente para separarácidos nucleicos. El DNA y el RNA que tienen carga negativa viajan desde el polo negativo al polo positivo. Los fragmentos migran en función de su tamaño; los fragmentos mas pequeños se mueven ,mas rápidamente y al cabo de la corrida serán los mas cercanos al polo positivo.
o Bromuro de etidio- es una molécula que se utiliza para teñir el DNA y visualizarlo en la agarosa. Es una moléculaplana que se intercala en la doble hélice que florece en luz ultravioleta.
o Poliacrilamida-Otro tipo de gelatina que se utiliza mayormente para separar proteínas. En la figura a continuación se evaluaron tres muestras, una de un individuo con hemoglobina normal (βAβA), otro heterocigótico(βAβS), y otro homocigótico para el alelo de anemia falciforme (βSβS). Los alelos βA y βS generan proteínasque tienen pesos moleculares diferentes y por eso su movilidad es diferente en la electroforesis. El alelo βA codifica para la proteína mas pequeña que es la banda que esta mas cerca del polo positivo. Los individuos homocigóticos tienen una sola banda porque los dos alelos generan la misma proteína, del mismo tamaño.
• El Southern Blot y Northern Blot son técnicas que utilizan laelectroforesis para separar ácidos nucleicos.
o Southern blot-se separan fragmentos de DNA por electroforesis de agarosa y se detectan fragmentos específicos utilizando una sonda o probe. La sonda es un fragmento de DNA que hibridiza con el fragmento de interés que esta en la gel porque tiene la secuencia complementaria. La sonda, a demás de hibridizar específicamente con la secuencia de interéstiene algo que permite su detección.
• Northern blot-similar al Southern blot pero se separa y detectan fragmentos de RNA.
• Western blot- se separan y detectan proteínas utilizando anticuerpos para la detección.
• Sonda (probe)-molécula que sirve para detectar un acido nucleico o proteína de interés. Para hacer la detección la sonda debe tener un floroforo o cualquier otra molécula quepermita su detección.
• Hibridación- secuencias complementarias se encuentran y forman puentes de hidrogeno.
• Restriction Fragment Length Polymorphism- esta técnica es una aplicación del Southern blot, pero detecta variantes (polimorfismos) causadas por cambios en la secuencia de DNA que alteran los sitios donde cortan las enzimas de restricción.
Enzimas de restricción:
Las enzimas derestricción son un tipo de endonucleasa que por ser dimericas cortan ambas cadenas de la doble hélice en la secuencia de reconocimiento. Estas enzimas cortan la doble hélice del ADN en secuencias bien especificas llamadas palíndromes. Un ejemplo de palíndromes esta ilustrado a continuación:
5’-GAATTC-3’
3’-CTTAAG-5’
Como se puede ver en esta secuencia, una secuencia palindromica selee igual en ambas hebras antiparalelas. La secuencia ilustrada es reconocida por la enzima EcoRI.
Los extremos que pueden dejar el corte son chatos (“blunt”) o cohesivos (“sticky”).
Cortes “sticky”*.
Cortes “blunt”*.
Preguntas adicionales para el capitulo 10:
1. Un mRNA codifica para un polipepido de 312 aminoácidos. El codón 53 es el...
Temario examen III-Parte II
A demás de los capítulos 7, 8, 9 los capítulos 10 y 11 brindan información importante sobre la expresión genética y técnicas importantes. El estudiante deberá enfocarse los conceptos que se incluyen en este documento con respecto a estos dos capítulos.
Capitulo 10. Debe leer la sección 10.2
• Electroforesis- técnica que se utiliza para separarmacromoléculas como las proteínas y los ácidos nucleicos. Para separar las macromoléculas las muestras se colocan en una matriz o gelatina y se aplica un campo eléctrico que facilita la separación. Pueden ver esta animación y la figura 10.4 del capitulo 10. http://learn.genetics.utah.edu/content/labs/gel/
o La electrophoresis de Agarosa- utiliza agarosa como matriz y se utiliza mayormente para separarácidos nucleicos. El DNA y el RNA que tienen carga negativa viajan desde el polo negativo al polo positivo. Los fragmentos migran en función de su tamaño; los fragmentos mas pequeños se mueven ,mas rápidamente y al cabo de la corrida serán los mas cercanos al polo positivo.
o Bromuro de etidio- es una molécula que se utiliza para teñir el DNA y visualizarlo en la agarosa. Es una moléculaplana que se intercala en la doble hélice que florece en luz ultravioleta.
o Poliacrilamida-Otro tipo de gelatina que se utiliza mayormente para separar proteínas. En la figura a continuación se evaluaron tres muestras, una de un individuo con hemoglobina normal (βAβA), otro heterocigótico(βAβS), y otro homocigótico para el alelo de anemia falciforme (βSβS). Los alelos βA y βS generan proteínasque tienen pesos moleculares diferentes y por eso su movilidad es diferente en la electroforesis. El alelo βA codifica para la proteína mas pequeña que es la banda que esta mas cerca del polo positivo. Los individuos homocigóticos tienen una sola banda porque los dos alelos generan la misma proteína, del mismo tamaño.
• El Southern Blot y Northern Blot son técnicas que utilizan laelectroforesis para separar ácidos nucleicos.
o Southern blot-se separan fragmentos de DNA por electroforesis de agarosa y se detectan fragmentos específicos utilizando una sonda o probe. La sonda es un fragmento de DNA que hibridiza con el fragmento de interés que esta en la gel porque tiene la secuencia complementaria. La sonda, a demás de hibridizar específicamente con la secuencia de interéstiene algo que permite su detección.
• Northern blot-similar al Southern blot pero se separa y detectan fragmentos de RNA.
• Western blot- se separan y detectan proteínas utilizando anticuerpos para la detección.
• Sonda (probe)-molécula que sirve para detectar un acido nucleico o proteína de interés. Para hacer la detección la sonda debe tener un floroforo o cualquier otra molécula quepermita su detección.
• Hibridación- secuencias complementarias se encuentran y forman puentes de hidrogeno.
• Restriction Fragment Length Polymorphism- esta técnica es una aplicación del Southern blot, pero detecta variantes (polimorfismos) causadas por cambios en la secuencia de DNA que alteran los sitios donde cortan las enzimas de restricción.
Enzimas de restricción:
Las enzimas derestricción son un tipo de endonucleasa que por ser dimericas cortan ambas cadenas de la doble hélice en la secuencia de reconocimiento. Estas enzimas cortan la doble hélice del ADN en secuencias bien especificas llamadas palíndromes. Un ejemplo de palíndromes esta ilustrado a continuación:
5’-GAATTC-3’
3’-CTTAAG-5’
Como se puede ver en esta secuencia, una secuencia palindromica selee igual en ambas hebras antiparalelas. La secuencia ilustrada es reconocida por la enzima EcoRI.
Los extremos que pueden dejar el corte son chatos (“blunt”) o cohesivos (“sticky”).
Cortes “sticky”*.
Cortes “blunt”*.
Preguntas adicionales para el capitulo 10:
1. Un mRNA codifica para un polipepido de 312 aminoácidos. El codón 53 es el...
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