Cromatografía en capa fina

PRÁCTICA 7: CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA
RESUMEN
Se trata de familiarizar al alumno con los fundamentos de la cromatografía, y con las manipulaciones que se realizan en la cromatografía en capa fina.
INTRODUCCIÓN
La cromatografía se utiliza para separar componentes de una mezcla homogénea. En este tipo de técnicas existen dos fases en contacto, la fase móvil y la fase estacionaria. Laestacionaria está formada por un sólido finamente dividido, o por un líquido retenido sobre un sólido, y la móvil está compuesta por un líquido o un gas que fluye por los poros de la fase estacionaria. En nuestra práctica utilizaremos una fase estacionaria en forma de una fina película depositada sobre un sustrato (aluminio, plástico o vidrio), técnica denominada como cromatografía en capa fina. El flujode la fase móvil ocurre gracias a las fuerzas capilares, que impulsan el líquido a través de la red de microcanales de la fase estacionaria.
Los componentes de la mezcla tienen una afinidad distinta por cada una de las fases. Tenderán a repartirse entre las dos fases en una proporción dada por el valor de la constante del equilibrio de intercambio (K). Una vez repartidos los componentes, laseparación se produce gracias al efecto de retención de la fase estacionaria sobre los componentes que están en contacto, y el efecto de desplazamiento propio de la fase móvil sobre esos componentes que se encuentran disueltos. Cuanto mayor sea la afinidad de un componente por la fase estacionaria, más tiempo pasará en contacto con esta, sin moverse, y tardará más en recorrer una distancia dada sobredicha fase. Al desplazamiento de los componentes a lo largo de la fase estacionaria, arrastrados por la fase móvil, se le llama elución.
En la cromatografía en capa fina se hace uso de las diferencias entre las constantes del equilibrio de adsorción/desorción de los componentes. Se emplea una fase estacionaria sólida (adsorbente) de carácter polar, y una fase móvil líquida (eluyente) de polaridadvariable. El adsorbente es un sólido poroso granulado, que tiene centros polares aptos para adsorber las moléculas polares de la mezcla (uno de los adsorbentes más utilizados es el gel de sílice). La fase móvil será un disolvente en el que los componentes deberán ser solubles. La velocidad de elución se incrementa al aumentar la polaridad de la fase móvil. En resumen, los solutos más polaresquedan retenidos, ya que se adsorben mejor sobre la fase estacionaria, mientras que los no polares eluyen con mayor facilidad. Para desplazar a los componentes polares hará falta utilizar disolventes muy polares.
A continuación, se detallarán todos los pasos para realizar correctamente la cromatografía en capa fina:
En la fase estacionaria se señala con un lápiz tantos puntos como muestras se vayana emplear, todos ellos a una altura de 1 cm desde la base de la placa.
Se disuelve la muestra a analizar en un disolvente, a ser posible volátil.
Utilizando las pipetas Pasteur, se añade una gotita de la disolución en los puntos señalados anteriormente. Después desecharemos estas pipetas.
Se introduce la placa en la cubeta, apoyándose en la pared para que quede inclinada. Se cierra la cubeta yse deja en reposo para que eluya.
Una vez el frente del disolvente esté cerca del borde superior de la placa, la sacaremos y haremos una señal con un lápiz del supuesto frente.
Si los compuestos son coloreados, marcaremos con lápiz las manchas que se originan. En caso contrario, utilizaremos un agente revelador, con el que conseguiremos colorear los productos.
Una vez hemos hecho todo esto,determinaremos el Rf (rate factor) de cada compuesto, que relaciona las distancias recorridas por cualquier compuesto y la distancia recorrida por el disolvente, y tiene un valor característico para cada compuesto en unas condiciones cromatográficas dadas. Para calcular Rf se tiene que:

Cuanto más polar es un compuesto, más retenido queda en el adsorbente polar y menos será su Rf. También...