cromatografia liquida

Cromatografía Líquida de Alta Eficacia (HPLC)
Introducción.
Este trabajo pretende sentar las nociones básicas para el empleo del HPLC.
La cromatografía líquida o High performance liquid chromatography (HPLC), es una técnica utilizada para separar los componentes de una mezcla. Consiste en una fase estacionaria no polar (columna) y una fase móvil. La fase estacionaria es sílica que se hatratado con RMe2SiCl . La fase móvil actúa de portador de la muestra. La muestra en solución es inyectada en la fase móvil. Los componentes de la solución emigran de acuerdo a las interacciones no-covalentes de los compuestos con la columna. Estas interacciones químicas, determinan la separación de los contenidos en la muestra. La utilización de los diferentes detectores dependerá de la naturaleza delos compuestos a determinar.
Es un tipo de cromatografía en columna utilizada frecuentemente en bioquímica y química analítica. También se la denomina a veces Cromatografía líquida de alta presión o Cromatografía Líquida de Alta Resolución (High pressure liquid chromatography) (HPLC), aunque esta terminología se considera antigua y está en desuso. El HPLC es una técnica utilizada para separar loscomponentes de una mezcla basándose en diferentes tipos de interacciones químicas entre las sustancias analizadas y la columna cromatográfica.
Método físico de separación basado en la distribución de los componentes de una mezcla entre dos fases inmiscibles, una fija o estacionaria y otra móvil.
La cromatografía es una técnica de separación de sustancias que se basa en las diferentesvelocidades con que se mueve cada una de ellas a través de un medio poroso arrastradas por un disolvente en movimiento
Con el objeto de aumentar la eficiencia en las separaciones, el tamaño de las partículas de fase fija se fue disminuyendo hasta el tamaño de los micrones, lo cual generó la necesidad de utilizar altas presiones para lograr que fluya la fase móvil.
De esta manera, nació la técnica decromatografía líquida de alta resolución (HPLC), que requiere de equipos especiales que permita trabajar con las altas presiones requeridas.

Este instrumento, permite trabajar en gradiente. De esta forma se pueden lograr con éxito separaciones utilizando mezclas variables de disolventes. Los componentes básicos que constituyen el equipo son los que muestra la figura a continuación:Nuestro equipo concretamente consta de:
Dos bombas: es importante saber que la bomba A es la situada a la izquierda y la B a la derecha para este caso en concreto.
Inyector automático: que permite la inyección de series de muestras en secuencia. De esta forma, automáticamente y uno tras otro pinchará los viales que les hayamos indicado en la secuencia.
Detector: como se observa el detector pertenecea un equipo antiguo. Por tanto, sólo detecta a la longitud de onda indicada en la ventana.
Controlador: es la parte más importante del equipo. Para nuestro caso constituye el ordenador real y en él es donde se diseñan los métodos de trabajo, se controlan flujos y presiones y se realizan las secuencias.
Ordenador: en este equipo constituye una herramienta para el registro de datos ya que nodisponemos del software para utilizarlo como controlador de todo el sistema.
Las bombas y el inyector automático disponen de un pequeño software. También disponen de una ventana, un teclado numérico y unas teclas de funciones especiales.

OBJETIVOS:
Aprender y dar a conocer el proceso de una cromatografía líquida de alta resolución y sus diferentes tipos.

Conoceremos la funcionalidad de lasdiferentes partes del equipo.
FUNDAMENTO
La HPLC, representa una de las herramientas más empleadas en el laboratorio analítico moderno.
Elementos que participan en una cromatografía
1. Fase estacionaria
2. Fase móvil
3. Muestra
En general, una cromatografía se realiza permitiendo que la (muestra) interaccione con un medio o matriz de soporte que se denomina fase estacionaria. Un segundo...